用免疫胶体金层析法检测血液标本中2型单纯疱疹病毒抗体.doc

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1、用免疫胶体金层析法检测血液标本中2型单纯疱疹病毒抗体王丹丹崔连东(辽宁省人民医院检验科辽宁沈阳110015)【中图分类号】R446.ll［文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)18-0057-02【摘要】目的建立了一种特异性的用于免疫胶体金层析技术(GICA)检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的免疫球蛋白IgGo方法共有239份血清和100份全血标本用免疫胶体金层析法进行检测，同时，血清的标本用ELISA方法作对照检测，全血标本分别用ELISA和免疫印迹法(IB)确定。结果与ELISA方法对比，GICA测定特异

2、性的HSV-2抗体的敏感性为100%(69/69,特异性为97.1%(171/176)；与HSV-1.轮状病毒和EB病毒抗体的交又反应分别为2.7%(3/112),2.9%(1/34)和6.2%(1/16)；与带状疱疹病毒和人类巨细胞病毒无交叉反应；一定量胆红素、甘油三酯或血红蛋白对该试验无影响；不同的采血方法如毛细管法，EDTA或肝素抗凝的静脉采血法，及血清对实验结果无影响。结论用免疫胶体金层析技术(GICA)检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的免疫球蛋白IgG是一种方便、简捷、快速和准确的试验方法。【关键词】免疫胶体金层析法

3、单纯疱疹病毒ELISA免疫印迹单纯疱疹病毒(HSV)是一种常见的可引起人类多种疾病的世界范围内的病毒。HSV可分为两种类型：HSV-1和HSV-2oHSV-1通常感染人的舌、口、唇、筛窦和眼，而HSV-2却与人类的生殖道和新生儿的感染相关。HSV可感染不同年龄的人群如新生儿、儿童和成年人。据统计，40岁的人群中，超过90%人血液中HSV-1抗体呈阳性⑴。在美国，大多数的性生活活跃的年轻人均有生殖道疱疹病毒感染⑵。HSV-2的主要传播方式是通过性传播［3］。典型的症状为疱疹性生殖道炎症,其表现为生殖道局部的溃烂，同时可伴随发热、淋

4、巴结炎和尿失禁。有些研究表明85%的原发疱疹性生殖道炎症是由HSV-2引起的［4］。由于很多的病例无明显的临床症状，因此，要有效地管理疱疹病毒的感染者，用血清学诊断来区分两种类型的病毒就显得尤为重要⑸。这两种类型的病毒的抗原有极高的相似性，然而，它们各自的糖蛋白却有很大的差异，可刺激机体产生不同的特异性抗体，并可用于商业上的诊断产品[6,7]o与蛋白印迹的方法相比,型特异性的血清学诊断方法也可以准确地诊断HSV-1和HSV-2的感染[8]o在临床实验诊断中，HSV-2的特异性血清诊断学方法主要是免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELI

5、SA)。这里我们介绍一种简便、快速，灵敏度高和特异性强的免疫胶体金层析技术，用于HSV-2的特异性糖蛋白抗体的检测。1材料和方法1.1标本359例临床收集用于检测HSV-1.2抗体的患者血清，其参考的结果是通过ELSIA方法获得。同时，为了研究交叉试验，271份血清检测检测了巨细胞病毒(n=ll)^带状疱疹病毒(n=14)>EB病毒(n=16),和轮状病毒(n=34)；为了研究干扰试验,在两个HSV-2抗体阳性和阴性的标本中加入甘油三酯、白蛋白、胆红素和血红蛋白，其血清终浓度分别为10mg/ml,60mg/ml、0.2mg/ml

6、和l220mg/mL为了研究不同的采血方法对胶体金层析法试验结果的影响，100名志愿者，分别用指尖毛细管采血法，EDTA及肝素抗凝静脉采血法和单纯血清采血法米血。试验米用双盲法，作为参考方法，HSV-2抗体检测米用商品ELISA试剂盒检测患者的血清标本。1.2免疫胶体金层析法当标本中存在HSV抗体时，抗体先与40nm的胶体金结合鼠抗人IgG抗体结合，随着硝酸纤维素膜的层析作用，结合物向前移动。就可以与三个条带上分别标记了HSV.1糖蛋白抗原、HSV-1糖蛋白抗原和羊抗鼠抗体结合，相应的条带就会出现。当测试条带和控制条带均出现时，

7、为阳性；当测试条带未出现而控制条带出现为阴性；仅有测试条带出现或未出现而控制条带未出现，表明检测结果无效。所有检测结果均要求第二个试验人员确认。其示意图如图1图1免疫层析法检测卡示意图1.3参考方法用市售的ELISA和免疫印迹试剂盒方法作对照，操作方法严格按照说明书的要求。用相应的检测巨细胞病毒、带状疱疹病毒、EB病毒和轮状病毒的ELISA试剂盒对标本进行检测。1.4数据评价接受者操作特性曲线(ROC)、似然比、阳性阴性预测值(PPV、NPV)等用MedCalcV9.3.0.0统计软件统计。2结果2.1用GICA方法检测血清的结

8、果在总共359份血清标本中，用GICA法和ELISA法分别检测，有89例HSV-2抗体阳性，阳性率为25.2%(89/359)。两种方法均阳性的为89例；均阴性为257例；有6份标本ELISA检测结果在临界值的范围内。其结果见表1。表1CIGA与ELISA法检测