丙型肝炎病毒抗体胶体金免疫层析法的初步建立.pdf

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1、EstablishmentofhepatitisCvirusantibodycolloidalgoldimmunochromatography4DissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByQiHongyuanSupervisor：Prof．WangYunlongMay2014摘要丙型肝炎是一种全球性流行的传染病，目前全球患病率约3％，约有1．8亿人感

2、染丙型肝炎病毒(HepatisCVirus，rtcv)，而高度慢性化是该病的最大特征。一般来说，急性HCV感染会显示亚临床状态，并导致慢性的肝脏疾病，患者常在无意识的情况下延误治疗，从而导致肝硬化和肝细胞癌的发生。目前国内尚无HCV抗病毒特效药物和相关疫苗。因此，控制HCV感染的形势十分严峻。目前主要靠早发现、早诊断和早治疗来防控HCV传染源、阻断传播途径，这对HCV的诊断提出较高要求。现在HCV的前期筛检主要为检测血清中的抗体，主要方法包括：酶联免疫法、聚合酶链反应、重组免疫印迹等。胶体金免疫层析方法与之相比，操作简单、携带方便、快速、特异，不需要任何设备和特殊

3、试剂即可得到检测结果，特别适用于现场检测和诊断。本课题基于胶体金的性质及免疫学原理，研制了一种能够快速诊断HCV抗体的胶体金免疫层析试纸条。即利用免疫胶体金技术，选择使用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，然后用其标记HCV重组抗原制备成金垫，同时将包被抗原与HCV单抗分别作为检测线与质控线蛋白包被硝酸纤维素膜，用于血清中HCV抗体的检测。为制备出特异性、灵敏度、稳定性俱佳的试纸条，在研究过程中，充分考虑了各种影响因素对试纸条品质的影响。通过对胶体金制备用水、重组抗原的标记浓度、标记pH值、包被抗原抗体浓度、不同硝酸纤维素膜、不同湿度环境下对包被的影响、不同粒径大小的胶体

4、金的灵敏度差异等因素进行摸索与探究，最终确定选择超纯水制备粒径大小约40nl'll的胶体金，标记蛋白浓度为20¨g／mL，采用SartoriusstedimCNl40无背衬膜在40％．60％的环境湿度下，质控线和检测线分别包被HCV单抗1mg／mL和HCV重组抗原1．5mg／mL，建立HCV胶体金双抗原夹心法。对制备的试纸条进行特异性、灵敏度、稳定性等方面系统检测，并与ELISA检测方法进行临床比较。结果表明该免疫胶体金试纸条特异性、灵敏度、稳定性较好，并方便、快捷，与ELISA法检测对比阳性率与阴性率俱佳。可用于丙肝病毒感染的早期诊断，具有一定的临床使用价值。关

5、键词：胶体金，双抗原夹心，免疫层析，丙型肝炎病毒AbstractHepatitisCisaglobalepidemicofinfectiousdiseases．theprevalencerateofabout3％．About180000000peopleareinfectedwithHCV,andtheheightofthechronicityisthebiggestcharacteristicofthedisease．Ingeneral，acuteHCVinfectionwilldisplaythesubclinicalstate，andleadtochroni

6、cliverdisease．Patientsoftendelaytreatmentinthecaseoftheunconscious，whichleadstotheoccurrenceofhepatoeellularcarcinomaandlivercirrhosis．AndthereisnoHCVeffectsofantiviraldrugsandvaccines．Therefore，controlofHCVinfectionsituationisgrim．Whiletheearlydiscovery,earlydiagnosisandearlytreatmen

7、tarethesourceofinfection．PreventionandcontrolofHCVinterrupttransmissionofthemosteffectivemeanstothediagnosisofHCV,whichputforwardhigherrequirements．Atpresent，theHCVscreeningforantibodydetectioninserum，themainmethodsinclude：enzymelinkedimmunosorbentassay,polymerasechainreaction，recombi

8、nanti