资源描述：
《高效液相色谱质谱法快速鉴定复方毛冬青冲剂中三萜皂苷活性成分.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、高效液相色谱质谱法快速鉴定复方毛冬青冲剂中三祐皂昔活性成分作者：杨运云郭鹏然陈怡禄邓六勤钟鸣吴庆晖【摘要】建立了高效液相色谱质谱法(HPLCMS)快速鉴定复方毛冬青冲剂中三菇皂昔活性成分的方法。以甲醇为萃取剂超声萃取复方毛冬青冲剂30mino采用高效液相色谱离子阱质谱(HPLCTTMS)和高效液相色谱飞行时间质谱(HPLCTOFMS)对萃取液进行分析，选用Agi]entZorbaxEclipseXDBC18色谱柱(250mniX4.6nim,5um),以水(含0.1%甲酸)乙月青为流动相进行梯度洗脱，柱后流出液采用电喷雾离子阱质谱(ESIITMS)和
2、电喷雾飞行时间质谱(ESITOFMS)的正、负离子模式进行检测。检测结果经离子阱一级质谱(TTMSI)、离子阱二级质谱(ITMS2)和分析时间质谱(TOFMS)信息分析，并与相关文献报道进行比较，鉴定出1种三菇酸和8种三菇皂首成分，并推测了其它3种可能的三菇皂昔化学成分，通过对照品对比分析，三菇酸确证为IlexgeninA,其中一种三菇皂昔确证为TlexsaponinAl□本方法无需对照品即司,快速有效地鉴定出复方毛冬青冲剂中的三站皂昔活性成分，为建立冲剂的质量标准提供了依据。【关键词】复方毛冬青冲剂，三站皂甘，高效液相色谱质谱1引言毛冬青(Radi
3、xi1icispubescentis)为冬青科(Aquifoliaceae)冬青属植物毛冬青(IlexpubescensHook.etAm.)的干燥根，是我国南方常用中药，已有多种成方制剂如毛冬青胶囊、毛冬青注射液、复方毛冬青氯贝酸铝片和复方毛冬青冲剂等收载于部颁标准，主要用于治疗循环系统疾病，有扩张血管及抗菌消炎的功效[1]。目前，市售毛冬青品种混乱，化学成分和药理作用差别较大，从而导致了毛冬青制剂的质量难以控制。因此，建立快速、有效地监测毛冬青制剂质量标准的方法十分必要。己报道的毛冬青的主要化学成分有齐墩果烷型和乌索烷型三菇酸及皂昔类、黄酮类、木
4、脂素类、酚酸类、脂肪酸和糖脂类等化合物[2〜10]。其中IlexosideOE2],IlexgeninA[3],IlexsaponinAl[3],IlexsaponinB[7],Bl[4],B2[4],B3[4],B4[5]和IlexsaponinC[5,6]等三菇酸和三菇皂昔被认为是其主要活性成分。复方毛冬青冲剂由毛冬青、板蓝根和大青叶3味中药材经适宜工艺制成，三菇酸和三菇皂甘仍为冲剂的主要活性成分。由于冲剂中糖类辅料等基体物质的含量很高，且三菇皂昔化合物的紫外吸收很弱，要通过高效液相色谱紫外检测(HPLCUV)或高效液相色谱二极管阵列检测(HPL
5、CDAD)测定其含量非常困难，并旦还需要价格昂贵的对照品。HPLCMS检测三菇皂甘类物质灵敏度很高，并能在线提供每个谱峰的分子量和结构信息,在不需要对照品的情况下，可以快速鉴定出复方毛冬青冲剂中的三茹酸和三菇皂甘活性成分，是冲剂质量标准和指纹图谱建立的有效手段之一。2实验部分2.1仪器与试剂1100HPLCMSTrapXCT高效液相色谱离子阱质谱联用仪（美国Agilent公司）;1200HPLCMSTOF高效液相色谱飞行时间质谱联用仪（美国Agi1ent公司）;ZorbaxEclipseXDBC18高效液相色谱柱（250mmX4.6mm,5um,美国
6、Agilent公司）。复方毛冬青冲剂（广州市儿童医院）；甲醇和乙腊均为色谱纯（美国Burdick&Jackson公司），实验用水为超纯水，由超纯水设备（美国MiliQ公司）制备。2.2实验步骤2.2.1样品提取取复方毛冬青冲剂1袋（10g）,开袋后倒入50mL容量瓶中,加入甲醇并定容,超声萃取30mino萃取完成后冷却至室温，吸取上层清液11札，过0.4511m滤膜，待测。2.2.2样品分析采用HPLCMSTrapXCT和HPLCMSTOF分析复方.毛冬青冲剂萃取液oAgi1entZorbaxEclipseXDBCl8色谱柱;流动相A为水(含
7、0.1%甲酸),B为乙腊,从0~5min,95%A,5%B;5~15min,B相从5%升至20%;15~40min,B相从20%升至40%;40~45min,B相从40%逐渐升至60%;45〜55而n,B相从60%逐渐升至95%;55〜70niin,5%A,95%B;流速l.OmL/min;进样量25uLo电喷雾(ESI)离子源，正、负离子两种检测模式；雾化N2气压力275.8kPa,干燥N2气流速9L/min,干燥N2气温度350°C;离子源前分流模式，30%柱后流出液分流至ESI源,70%分流至废液瓶;毛细管电压3500V;扫描质量范围m/z50
8、~1500。离子阱质谱分析时阱深对应稳定区中心离子m/z800;AutoMS2模式，自动寻找丰度最高的3个离
