高效液相色谱质谱法快速鉴定复方毛冬青冲剂中三萜皂苷活性成分论文

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1、高效液相色谱质谱法快速鉴定复方毛冬青冲剂中三萜皂苷活性成分论文杨运云郭鹏然陈怡禄邓六勤钟鸣吴庆晖【摘要】建立了高效液相色谱质谱法(HPLCMS)快速鉴定复方毛冬青冲剂中三萜皂苷活性成分的方法。以甲醇为萃取剂超声萃取复方毛冬青冲剂30min。采用高效液相色谱离子阱质谱(HPLCITMS)和高效液相色谱飞行时间质谱(HPLCTOFMS)对萃取液进行分析，选用AgilentZorbaxEclipseXDBC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，以水(含0.1%甲酸)乙腈为流动相进行梯度洗脱，柱后流出液采用电喷雾离子阱质谱(ESIITMS)和电喷雾飞行时

2、间质谱(ESITOFMS)的正、负离子模式进行检测。检测结果经离子阱一级质谱(ITMS1)、离子阱二级质谱(ITMS2)和分析时间质谱(TOFMS)信息分析，并与相关文献报道进行比较，鉴定出1种三萜酸和8种三萜皂苷成分，并推测了其它3种可能的三萜皂苷化学成分，通过对照品对比分析.freel.)的干燥根，是我国南方常用中药，已有多种成方制剂如毛冬青胶囊、毛冬青注射液、复方毛冬青氯贝酸铝片和复方毛冬青冲剂等收载于部颁标准,主要用于治疗循环系统疾病，有扩张血管及抗菌消炎的功效1。目前，市售毛冬青品种混乱，化学成分和药理作用差别较大，从而导致了毛冬青制剂的质量难以控制。因此，

3、建立快速、有效地监测毛冬青制剂质量标准的方法十分必要。已报道的毛冬青的主要化学成分有齐墩果烷型和乌索烷型三萜酸及皂苷类、黄酮类、木脂素类、酚酸类、脂肪酸和糖脂类等化合物2～10。其中IlexosideO2，IlexgeninA3，IlexsaponinA13，IlexsaponinB7,B14,B24,B34,B45和IlexsaponinC5,6等三萜酸和三萜皂苷被认为是其主要活性成分。复方毛冬青冲剂由毛冬青、板蓝根和大青叶3味中药材经适宜工艺制成，三萜酸和三萜皂苷仍为冲剂的主要活性成分。由于冲剂中糖类辅料等基体物质的含量很高，且三萜皂苷化合物的紫外吸收很弱，要通过高效液相色

4、谱紫外检测(HPLCUV)或高效液相色谱二极管阵列检测(HPLCDAD)测定其含量非常困难，并且还需要价格昂贵的对照品。HPLCMS检测三萜皂苷类物质灵敏度很高，并能在线提供每个谱峰的分子量和结构信息，在不需要对照品的情况下，可以快速鉴定出复方毛冬青冲剂中的三萜酸和三萜皂苷活性成分，是冲剂质量标准和指纹图谱建立的有效手段之一。2实验部分2.1仪器与试剂1100HPLCMSTrapXCT高效液相色谱离子阱质谱联用仪(美国Agilent公司);1200HPLCMSTOF高效液相色谱飞行时间质谱联用仪(美国Agilent公司);ZorbaxEclipseXDBC18高效

5、液相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm，美国Agilent公司)。复方毛冬青冲剂(广州市儿童医院);甲醇和乙腈均为色谱纯(美国BurdickJackson公司)，实验用水为超纯水，由超纯水设备(美国MiliQ公司)制备。2.2实验步骤2.2.1样品提取取复方毛冬青冲剂1袋(10g)，开袋后倒入50mL容量瓶中，加入甲醇并定容，超声萃取30min。萃取完成后冷却至室温，吸取上层清液1mL，过0.45μm滤膜，待测。2.2.2样品分析采用HPLCMSTrapXCT和HPLCMSTOF分析复方毛冬青冲剂萃取液。AgilentZorbaxEclipseXDBC18色谱柱;流动

6、相A为水(含0.1%甲酸)，B为乙腈，从0～5min，95%A，5%B;5～15min，B相从5%升至20%;15～40min，B相从20%升至40%;40～45min，B相从40%逐渐升至60%;45～55min，B相从60%逐渐升至95%;55～70min，5%A，95%B;流速1.0mL/min;进样量25μL。电喷雾(ESI)离子源，正、负离子两种检测模式;雾化N2气压力275.8kPa，干燥N2气流速9L/min，干燥N2气温度350℃;离子源前分流模式，30%柱后流出液分流至ESI源，70%分流至废液瓶;毛细管电压3500V;扫描质量范围m/z50～1500。离子阱

7、质谱分析时阱深对应稳定区中心离子m/z800;AutoMS2模式，自动寻找丰度最高的3个离子进行二级质谱。飞行时间质谱分析时，参比离子m/z121.0509,922.0098;分辨率11500(922.0098)。分析化学第37卷第10期杨运云等：高效液相色谱质谱法快速鉴定复方毛冬青冲剂中三萜皂苷活性成分3结果与讨论3.1HPLCMS分析结果三萜皂苷类化合物ESIMS正、负离子模式下的离子化效果均很理想。图1为复方毛冬青冲剂萃取液的HPLCITMS正、负离子全扫描质量色谱图。文献1