跑核酸电泳胶.doc

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1、跑核酸电泳配制琼脂糖凝胶50×TAEBuffer(pH8.5)组份浓度2MTris-醋酸，100mMEDTA配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris242gNa2EDTA·2H2O37.2g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加入57.1ml的乙酸，充分搅拌。4.加去离子水将溶液定容至lL后，室温保存。用时稀释成1×TAEBuffer(pH8.5)Agarose凝胶配制方法1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。2.根椐制胶量及

2、凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保

3、证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入0.175µlgoldwell,并充分混匀（一定要）。注：goldwell是一种对皮肤和眼睛有刺激性物质。使用含有goldwell的溶液时，请戴好手套。6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5min之间。7.在室温下使胶凝固(大约30min~1h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。琼脂糖凝胶浓度与

4、线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp)0.5%0.7%1.0%1.2%1.5%2.0%1,000~30,000800~12,000500~10,000400~7,000200~3,00050~2,0006×LoadingBuffer(DNA电泳用)组份浓度30mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)XyleneCyanolFF0.05%(W/V)BromophenolBlue配制量500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。EDTA4.4

5、gBromophenolBlue250mgXyleneCyanolFF250mg2.向烧杯中加入约200ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。3.加入180ml的甘油(Glycerol)后，使用2NNaOH调节pH值至7.0。4.用去离子水定容至500ml后，室温保存。跑核酸电泳1）将Agarose凝胶放入电泳槽中1)加样:在点样板或一次性手套上混合3µIDNA样品和3µI6×LoadingBuffer,6×LoadingBuffer的最终稀释倍数应不小于1X.用微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内

6、,每加完一个样品更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).1)电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.2)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.