酶解法提取食用菌多糖.doc

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1、酶解法提取食用菌多糖食用菌多糖是由l0个以上的单糖以糖苷键连接而成的高分子多聚物，存在于食用菌的菌丝体、子实体和发酵液中。食用菌多糖有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和抗感染活性【1，同时还有增强免疫、抗氧化、降低血糖、抗溃疡、抗衰老、抗辐射等方面的生物活性和生理功能食用菌组成复杂，除多糖外还含有蛋向质、纤维素、半纤维素和果胶等物质，这些物质的存在会影响多糖的浸L叶J．因此在多糖提取过程巾适当加人酶制剂如水解纤维素的纤维素酶、水解果胶质的果胶酶等有利于多糖的浸，在提高溶出效率的同时，为后续捉取液的精制

2、创造有利条件{l0】。酶解法的一般方法为按一定料液比加入样品干粉和生物酶、蒸馏水，在合适温度和pH值下酶解一定时间，然后升温灭酶，在合适的温度下提取一定时间，离心取上清液，即可测定多糖含量I⋯。以下分别介绍单一酶法和复合酶法在食用菌多糖提取巾的应用。   1．1单一酶法提取食用菌多糖单一酶法是指一种酶来辅助提取食用菌多糖，从而提高多糖提取率。常用的酶有蛋白酶、纤维素酶和果胶酶等。   蛋白酶可破坏蛋白质的肽键，水解细胞中的游离蛋白质．破坏其空问结构，使其变得松散。同时蛋白酶还可水解蛋白聚糖和糖蛋白

3、中的蛋向质，降低其对多糖的结合率，使多糖更易浸}H。刘青娥I⋯彳F推荐的最佳提取条件下分别考察了果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶对袖珍菇多糖提取效率的影响，以直接水提法为对照，结果显示木瓜蛋白酶酶解法有最佳提取效果，多糖提取率提高了95％，试验考察了酶解温度、酶用量、pH和酶解时问对木瓜蛋白酶法多糖得率的影响．得的结果是酶解温度为50℃左右时多糖提取率最高，随着温度的升高，多糖提取率下降；木瓜蛋白酶朋量为2．O％。冈浓度增加到2．0％以后，再增加酶用量多糖提取率基本不再增加；最佳酶解pH值为5．2，因

4、酶对pH值较为敏感，适当的pH值可维持酶活性中心的最佳空问构象，促进酶与底物的结合，提高反应速率：多糖得率随着酶解时间的延长而增加，超过100rain时有所下降，是由于酶解时间太长会引起糖结构变化甚至碳环裂解，致使多糖得率降低。    纤维素酶可使纤维素、半纤维素等物质降解，从而使细胞内的成分更易向提取介质扩散，食用菌多糖存在于子实体的细胞壁内，细胞壁的结构由纤维素维持，使用纤维素酶可水解细胞壁，提高多糖的浸率。刘晓鹏等Il利用纤维素酶辅助提取茶树菇多糖，比较了酶解法和水提法2种方法，水提法提取茶

5、树菇多糖料液比为1：60，提取时间120rain．温度为6O℃时提取效果最佳，其多糖平均提取率为1．40％。纤维素酶酶解辅助提取茶树菇多糖的平均提取率为2．38％，比水提法提高了70．47％。纤维素酶酶解辅助提取茶树菇子实体多糖的料液比为1：80，酶浓度1．5％，浸提液DH值为6．0，提取温度为50℃，提取时间为60rain．可以发现纤维素酶解法节省原料，缩短了提取时间，反应条件更为温和．提取率更高。而刘青娥⋯的酶法提取袖珍菇多糖试验中，纤维素酶酶解法较之水提法多糖提取率提高了42％。李清等llU

6、以羊肚菌为实验材料研究了酶法提取的T艺条件．其中纤维素酶加量为15％，温度为45℃．提取时间为1h时，其多糖浸提率为2．063％，优于水浸提法，同样条件的热水浸提法羊肚菌多糖得率仅为0．56％。使用纤维素酶提取食朋菌多糖优于水提法，其条件温和．提取率高且不影响后续提取。   1．2复合酶法提取食用菌多糖    复合酶法即使用2种以上的酶对多糖进行提取，多采用一定比例的蛋白酶、纤维素酶和果胶酶进行酶解。复合酶法的提取条件温和，提取率通常比单一酶法高，且杂质较易除去，能源消耗低。邹东恢等I】利用木瓜蛋

7、白酶、纤维素酶复合提取香菇多糖，其最佳一[艺条件是：木瓜蛋白酶与纤维素酶质量比为2：1，复合酶质簧分数为0．4％，料液比为】：20，酶解反应的温度55℃，pH值6．5，反应时问3h．提取率可达16．1％。马淑凤等l】4j利用二次回归正交旋转组合设计法．探寻复合酶法提取门灵菇菌丝体多糖的最佳T艺，复合酶系组成为纤维索酶、蜗牛酶、溶壁酶、中性蛋白酶．质量比为3：2：0，5：5。试验结果表明当酶用量为2．53％、酶解温度39．6、酶解时问3．2h、pH值7．2时，多糖得率最高可达8．23％，而水提法多糖

8、得率为6．36％(由该实验室测得)，高出i．87％。梁敏采，[}j木瓜蛋白酶、纤维素酶提取香菇多糖，加酶比例为2：l(木瓜蛋白酶：纤维素酶)，酶解反应温度55℃，pH值6．5，反应时间3h，多糖的提取率为16．1％，与传统水提法相比较，提取率提高了8．6％。可见．复合酶法处理可明显提高糖的提取率。    酶法提取食用菌多糖经大量实验证明，可提高多糖的得率，且反应温度较低，提取时间较短；不足之处是酶的价格较高，又容易失活，实验过程中温度控制要求严格(因酶的最佳温度在很小的范罔内，条件