mthfr基因c667t多态性和动脉血栓性脑梗死关联性探究

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1、MTHFR基因C667T多态性和动脉血栓性脑梗死关联性探究　　[摘要]目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C667T多态位点对血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平的影响及其与动脉血栓性脑梗死的相关性。方法选取年龄、性别及危险因素匹配的动脉血栓性脑梗死患者和对照组各84例，采用荧光定量法测定血浆Hcy水平，采用PCR-RFLP技术对MTHFR基因C667T位点进行分型。结果病例组和对照组中MTHFR基因C667T位点基因型TT携带者血浆Hcy水平显著高于基因型CC及CT携带者（病例组：t=2.292，P=0.024；对照组：

2、t=2.098，P=0.039）。两组间基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义（基因型：χ2=1.313，P=0.519；等位基因：χ2=1.296，P=0.255）。结论MTHFR基因C667T位点等位基因T可能与血浆Hcy水平升高有关，但等位基因T可能不是动脉血栓性脑梗死的主要危险因素。[关键词]亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；同型半胱氨酸；动脉血栓性脑梗死[中图分类号]R743.33[文献标识码]B[文章编号]1673-9701（2013）17-0032-03亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydr

3、ofolate9reductase，MTHFR）基因C667T多态位点是脑梗死遗传易感性研究的主要候选基因之一，但研究结果存在差异[1，2]。越来越多学者提出研究差异与脑梗死异质性有关[3，4]。MTHFR基因C667T多态位点上等位基因T引起机体同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高，促进动脉粥样硬化形成。因此本研究以动脉血栓性脑梗死为研究对象，探讨MTHFR基因C667T多态位点与脑梗死的关联性及Hcy的中介作用。1对象与方法1.1研究对象本研究病例组84例为顺德均安医院2011年2月～2012年8月住院

4、患者，经颅脑CT检查，结合经颅多普勒、颈动脉与椎动脉彩超结果（均存在动脉粥样硬化斑块或狭窄），临床诊断动脉血栓性脑梗死。其中男60例，女24例，平均年龄（74.1±10.1）岁。对照组为同期门诊健康检查者，其中男56例，女26例，平均年龄（72.3±9.6）岁，排除既往脑卒中、冠心病、周围血管病、血液系统疾病、肝肾功能异常、严重感染及恶性肿瘤及2周内服用叶酸、B族维生素史者。入选对象均为本地汉族人群。两组间年龄、性别和危险因素组成无显著差异（表1）。本研究经顺德均安医院医学伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。1.2方法9

5、1.2.1血浆Hcy水平测定清晨空腹采集外周静脉血（病例组在起病后一周采血）4mL，2%EDTA抗凝，离心后血浆与细胞沉淀分别用于Hcy水平测定和提取基因组DNA。采用荧光生化分析技术，使用Biotech公司的Hcy试剂盒测定血浆Hcy水平。1.2.2基因分型采用PCR-RFLP技术进行MTHFR基因C667T位点分型。引物序列P1：5’-CAAAGGCCACCCCGAAGC-3’，P2：5’-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’[5]。PCR反应体系为15μL，常规配制。反应条件：①94℃5min；②94℃1min

6、；③64℃30s；④72℃1min；⑤返回34个循环；⑥72℃5min；⑦4℃保存。扩增产物于37℃恒温HinfI酶切过夜。等位基因C未经酶切长为245bp，等位基因T被酶切至173bp及72bp。2%的琼脂糖凝胶电泳检测基因型。纯合子CC型仅有245bp条带，TT型显示173bp和72bp两条带，杂合子CT型则显示245bp、173bp和72bp三条带。1.3统计学分析计数资料采用χ2检验分析，正态分布计量资料中用均数和标准差描述、用t检验进行比较。所有数据统计均使用SPSS11.0软件，以α=0.05作为有无统计学意义的判

7、断标准。2结果92.1血浆Hcy水平84例病例组血浆Hcy水平（4.1～30.9）μmol/L，平均（12.70±4.30）μmol/L；84例对照组血浆Hcy水平（3.6～25.8）μmol/L，平均（12.73±4.48）μmol/L。参照美国心脏病学会标准（100μmol/L重度升高），病例组轻度升高22例，中度升高1例，无重度升高病例；对照组轻度升高21例，无中度升高和重度升高病例。两组资料正态性检验P值均>0.05。病例组与对照组间血浆Hcy水平差异无统计学意义，见表2。2.2MTHFR基因C667T多态位点对血浆H

8、cy水平的影响病例组中基因型为CC、CT和TT型者分别为44例、34例和6例；对照组中基因型为CC、CT和TT型者分别为51例、29例和4例。组内基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（病例组：P=0.870；对照组：P=0.962）。病例组中基因型TT携带者血浆Hc