动物蛋白质粗提实例.docx

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1、大连湾牡蛎蛋白的分离提取及分子量测定崔韶晖，王艳颖，崔杰，王岩，左明，宁洪良1、试剂Tris—HCI、SDS、2-巯基乙醇、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、TEMED、葡聚糖凝胶G-100(SephadexG一100)为进口分析纯试剂；冰醋酸、NaCl、Glycine、甘油、溴酚蓝、过硫酸铵、考马斯亮蓝、甲醇、标准蛋白(Marker)、牛血清蛋白等为国产分析纯试剂．2、仪器FSH-2型可调高速匀浆器、TDL-40B大容量低速离心机、旋转蒸发仪(BUCHI)、紫外分光光度仪、垂直板电泳装置(安玛西亚)、凝胶成像分析仪(ImageStation44

2、0CF，KODAK)、脱色摇床、层析柱(1.0x30cm)等．3、实验方法1制备牡蛎匀浆用自来水清洗新鲜牡蛎，除去内脏，再用去离子水冲洗干净，取5个为一组放入匀浆杯中，调速7000～10000转将牡蛎匀浆破碎成浆状组织液体．2冰醋酸粗提牡蛎中蛋白组分向匀浆液中滴加足量的冰醋酸，边滴加边用玻璃棒搅匀，直至匀浆液不再粘稠为止，静置10min，使冰醋酸与蛋白充分反应，移人离心管中离心分离，转速4000r／rain离心20分钟，反复提取2次，合并上清液，用旋转蒸发仪浓缩提取。大鼠肝细胞过氧化物酶体的提取骆子生　王敏彦　姜玲玲1.1　动物健康SD大

3、鼠,体重300g左右，鼠龄2～3个月。由河北省实验动物中心提供。1.2　试剂所用试剂均为国产分析纯试剂。1.3　主要仪器日立80P—7超速离心机，RPS40T水平转头，日立UV330紫外—可见分光光度计。4、过氧化物酶体的分离大鼠断头处死后，立即取出肝脏，用冷生理盐水将血迹冲洗干净。称取10g肝脏，用剪子剪碎后，加50ml提取缓冲液(蔗糖0.25mol/L，乙醇0.1%，Na3EDTA1mmol/L，Tris-HCl，pH7.4，10mmol/L)，在冰浴中匀浆(以下操作均在冰浴中进行)。④肝匀浆3000r/min、离心10min，除去组

4、织块，取上清液备用。⑤向沉淀中加入50ml提取缓冲液再次匀浆，肝匀浆3000r/min、离心6min，弃沉淀(A)。将两次离心所得上清液合并，7000r/min、离心5min，取上清。13500r/min、4℃离心20min,弃上清(B)，留沉淀。⑥向沉淀中加入40ml缓冲液混悬后，再次13500r/min、离心20min，弃上清，取沉淀。用3ml缓冲液将沉淀悬浮，此为过氧化物酶体的粗提物(C)。⑦在13ml的PA离心管中加入45.8%(w/w)的蔗糖液5ml，再缓慢加入37.4%(w/w)的蔗糖液4ml，制成不连续梯度液。将混悬好的过氧

5、化物酶体的粗提物(约4ml)缓慢加在梯度液上，用RPS40T水平转头，慢加速至27500r/min、离心2h。⑧样品被分成肉眼可见的三层分布状态(见图1)：上边一层是微粒体，中间一层是线粒体，最底部沉淀即是过氧化物酶体。收集管底的沉淀，用13ml提取缓冲液悬浮，27500r/min、离心2h，洗去浓蔗糖溶液。东亚钳蝎纤溶活性蛋白的分离纯化及其作用性质研究黄锦兵1、主要实验仪器组织捣碎机：佛山市顺德区方胜电器实业有限公司KDC-40低速离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司JB-2型恒温磁力搅拌器：上海雷磁新泾仪器有限公司AUY220电子分

6、析天平：梅特勒一上海HC—TPll—5架盘药物天平：上海精科天平KDC-160HR高速冷冻离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司DHG一9140A型电热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司TH-500梯度混合器：上海沪西分析仪器厂有限公司HL-2恒流器：上海沪西分析仪器厂有限公司BSE-100自动部分收集器：上海沪西分析仪器厂有限公司UV-180紫外检测仪：上海沪西分析仪器厂有限公司XWT-S小型台式记录仪：上海自动化仪表三厂1810B自动双重纯水蒸馏器：上海建强玻璃仪器有限公司梅特勒一托利多SevenEasypH计：梅特勒一托利多仪器(

7、上海)有限公司2、主要实验试剂：磷酸氢二钠：分析纯，天津市大茂化学试剂厂磷酸二氢钠：分析纯，天津市大茂化学试剂厂硫酸铵：分析纯，天津市福晨化学试剂厂三(羟甲基)氨基甲烷：分析纯，天津市大茂化学试剂厂盐酸：分析纯，广州市东红化工厂氢氧化钠：分析纯，天津市大茂化学试剂厂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)：分析纯，广州化学试剂厂氯化钡：分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司聚乙二醇10000：实验试剂，天津市瑞金特化学品有限公司氯化钠：分析纯，天津市大茂化学试剂厂D45nm透析袋：美国进口DEAE-32纤维素：广东省汕头市西陇化工厂进口分装(沃特曼产品

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