微生物测定标准操作规程CP.doc

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1、起草人Preparedby:起草日期Date:_____________________QC审核人Reviewedby:审核日期Date:_____________________QC审核人Reviewedby:审核日期Date:QA批准人Approvedby:批准日期Date:质量部QD颁发部门IssuedbyQC执行日期EffectiveDate替换文件ReplacedForSOP-QC-540-06微生物限度测定标准操作规程复审日期ReviewDate分发部门：DistributedtoQA,QC分发号DistributionNo.:目的Pur

2、pose依据中国药典2015版，建立物料微生物限度的标准测定程序，以保证有关物料项下的微生物限度的测定符合药典及现行GMP的要求。范围Scope适用于QC按照中国药典相关规定所进行的微生物限度的测定。职责ResponsibilityQC检验员负责遵守该规程，QC负责人负责监督与管理。内容Procedure1微生物计数法1.1概述1.1.1微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。1.1.2微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中的微生物的检出。1.1.3如供试品中有

3、抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。1.1.4供试液制备是如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。1.1.5微生物限度检查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行。1.1.6除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为20～25℃。1.2计数方法1.2.1计数方法包括平皿法、薄膜过滤法、和最可能数法（MPN法）。MPN法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合的方法。1.2.2供试

4、品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。1.3检验量1.3.1检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。1.3.2除另有规定，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重物料、微量包装的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。1.4供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需要加温时，应均匀加热，且温度应不超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基

5、，不得超过1小时。常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。1.4.1水溶性供试品取供试品10g/ml，用大豆酪蛋白消化肉汤或磷酸盐缓冲液（pH7.2）至100ml，混匀，作为1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8,。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系类稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。1.1.1水不溶性非油脂类供试品取供试品10g/ml，用大豆酪蛋白消化肉汤或磷酸盐缓冲液（pH7.2）至100ml，混匀，作为1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1%

6、的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系类稀释。1.1.2油脂类供试品取供试品10g/ml，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解，或与最少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般不超过40℃（特殊情况下，最多不超过45℃），小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成1:10供试液，保温，混合，并在最短时间内形成乳状液。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。1.2需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定大豆酪蛋白消

7、化琼脂或大豆酪蛋白消化肉汤用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂用于测定霉菌和酵母菌总数。阴性对照试验：以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。1.2.1平皿法平皿法包括倾注法和涂布法。倾注法：除另有规定外，取规定量供试品，按1.4进行供试液制备，取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃熔化的大豆酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。涂布法：取15～20ml温度不超过45℃的大豆酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，

8、制成平板，采用适宜的方法