实验七人类性染色质（Barr氏小体和Y小体）标本制备和观察.ppt

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1、实验七人类性染色质(Barr氏小体和Y小体)标本制备与观察（教材P47-49实验11,有改动，并增Y小体检测）一、实验目的：1.掌握哺乳动物性染色质检测方法；2.掌握X染色质失活机制及其意义。1X染色质：二、实验原理：1.剂量补偿观点的提出：Muller（1932）：剂量补偿（Dosagecompensation）观点——可能存在着一种维持雌、雄两性生物基因表达一致的遗传机制。2.X小体的发现（1949，M.L.Barr等）：雌猫神经细胞核膜边缘深染的小体见于人类女性口腔上皮细胞（大小1~1.5μm）Barr小体为Δ形/Ο形，数目=X染色体数目-1间期失

2、活的异固缩状态的X染色体⑴正常雌性个体，两条X染色体中有一条是失活的；⑵失活是随机的⑶失活出现在胚胎早期，且总是这条X染色体失活。（4）杂合雌体在伴性基因作用上为嵌合体3.Lyon假说是否所有组织、全部细胞、任何时间都存在这种X小体；失活的X小体是如何复制……5.应用遗传临床法医诊断4.疑问：不同性染色体组成的人的X小体另外:Y小体（Pearson,1970）男性细胞核内近中央，直径0.25-0.3μmΟ形为Y染色体长臂远端异染色质示意图应用遗传性别鉴定Y染色体异常检查三、实验步骤人体毛囊细胞性染色质的标本制备X小体和Y小体分析各用女、男材料（至少各两根

3、）①取材（女、男）拔取带毛囊头发→45%醋酸解析5min→吸掉余酸→印染转移（教材p48）或以镊子轻轻刮涂毛囊于载玻片A、用于X小体的材料（女，男的做对照）染色-观察：改良品红，2-3min→盖片→压片→LM镜检。1．毛球，2.内层毛囊，3.外层毛②X、Y小体实验平行做B、用于Y小体的材料（男，女的做对照）固定：乙醇-乙醚1:1，20-30min（可达12h）→95%乙醇30min→晾干。（周二两组上课时间做到此暂停）染色：Macllvaine’s缓冲液pH6，5min→0.2%二盐酸喹吖因，10min→换新Macllvaine’s缓冲液pH6，5min

4、×2（分色）→盖盖玻片、暗处平放·周一、四、五组上课时到此暂停·周二上午组晚上9点染色、下午组晚上9点半染色观察：染色12-17h内，荧光显微镜观察周一组周二上午8-10点观察周二上午组周三下午1点、下午组周三下午3点观察周四组周五上午10点观察周五组周六上午9点观察Barr氏小体染色图Barr氏小体染色图讲完课后一个同学先为全班配制：Macllvaine's缓冲液（pH6）A液（0.1M柠檬酸溶液）：柠檬酸（C6H5O7·H2O)21g,蒸馏水1000mL溶解。B液(0.2M磷酸氢二钠溶液):磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）71.6g，蒸馏水1

5、000mL溶解。pH6的缓冲液：A液73.7mL，B液126.3mL混合（以200mL计）。