人类性染色质小体的制备与观察课件

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1、实验十人类性染色质小体的制备与观察实验目的实验原理实验材料与药品实验方法注意事项实验作业思考问题掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考依据。实验目的实验原理发现1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有。进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为巴氏

2、小体，也称为X染色质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形等。研究发现，间期核内X染色质的数目总是比X染色体的数目少1。进一步研究表明：X染色质是一条异染色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间期复制要比其他的染色体晚。？莱昂假说（1961年，MaryLyon）雌性哺乳动物体细胞内仅有一条X染色体是有活性的。另一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞核中螺旋化而呈异固缩的X染色质。X染色体的失活是随机的，也是恒定的。X染色体失活发生在胚胎早期（妊娠第16天）。在此以前的所有细胞中的X染色体都是有活性

3、的。证据1莱昂学说的生物化学证据首先来自对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)杂合妇女的皮肤成纤维细胞中G-6-PD表达的研究。G-6-PD位于X染色体上，其活性在男女中是相同的。G-6-PD有A、B两种类型，二者仅相差一个氨基酸，由一对等位基因GdA和GdB编码。当取自GdA/GdB杂合妇女的皮肤细胞原始培养物时，电泳图谱上出现A、B两种条带，而当检测克隆培养物时，每个克隆只出现一条电泳带，完全表现为A型或B型条带(图)。克隆培养时，每个克隆只出现一条电泳带证据2—玳瑁猫三色猫，又叫玳瑁猫。雌性的

4、三色猫腹部的毛是白色的，背部和头部的皮毛由桔黄色和黑色斑组成。这种雌猫是X-连锁基因杂合体。b基因控制橙色毛皮，其等位基因B是控制黑色的毛皮。而白色毛则由常染色体上的基因决定。带有b基因的X染体若失活，B基因表达，产生黑色毛斑；若带有B基因的X染色体失活，b基因表达，则产生橙黄色毛斑。Y染色质正常男性的间期细胞用荧光染料染色后，在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3--1μm左右，称为Y染色质。Y染色质在间期也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧光。这是男性特有的

5、，女性细胞中不存在。细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相同。口腔颊部粘膜上皮细胞毛囊细胞60%冰醋酸45%冰醋酸卡宝品红75%乙醇实验材料与药品1．口腔颊部粘膜上皮细胞巴氏小体观察刮取颊部粘膜上皮细胞（用灭菌玻璃片）→涂片（两片45°角）→60%冰醋酸固定5min→吸去冰醋酸，卡宝品红染色10min→盖片→镜检实验方法2．发根毛囊细胞巴氏小体观察拔取带毛囊头发一段→→→45%冰醋酸解离5min→→剥取毛囊→→卡宝品红染色10min→→→压片观察注意事项将第一次刮下的口腔粘膜上皮细胞用酒精棉球擦去，在

6、原位重复刮一下制片；待涂片略干再加冰醋酸固定染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质不易区分；毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针敲片，使细胞解离；分别观察男女各50个可数细胞，计算显示X染色质所占百分比。观察中选绘1-2个典型细胞，标明X染色质的形状和部位。实验作业可数细胞的标准：核质染色呈网状或颗粒状；核膜清晰，无缺损；染色适度，周围无杂质。X染色质男女个体细胞中的巴氏小体并非每个细胞都可看到巴氏小体，这与细胞的状态、着色情况有关。G1期：DNA没有复制，巴氏小体最小。S期：DNA在进行复制，

7、巴氏小体中等。G2期：DNA完成复制，巴氏小体最大。正常女性（46，XX）的口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，一般不超过30～35%，仅含1个X染色质。男性只有0～3%，平均0.7%。思考问题1.失活的X染色体上基因是否都失去了活性？答：并非所有基因都失去了活性，有一部分基因仍保持一定活性，因此X染色体数目异常的个体在表现型上有别于正常个体，如47，XXY（先天性睾丸发育不全）和47，XXX（多X综合征）。1974年，新莱昂假说认为X染色体的失活是部分片段的失活。如Xg血型。2.失

8、活的X染色体是否永远都失去了活性？答：不是，如减数分裂时卵巢中初级卵母细胞异固缩的X染色质恢复到常染色质状态。Xg血型系统Xg血型系统1962年J．D．曼等用一个多次输血的病人的血清查出一种新的红细胞抗原Xga。这一抗原受X染色体短臂上Xg座位控制，有两个等位基因Xga和Xg，Xg是无效等位基因，表型可以是Xg（a＋）或Xg（a－）。Xga是迄今所知唯一X连锁的红细胞抗原。如果父亲是Xg（a＋），母亲是Xg（a-），则所有女儿都将是Xg（a＋），所有儿子