RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响.doc

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1、·中文论著摘要·RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响南方医科大学刘一柏目的构建针对靶向基因FUBP1（farupstreamelementbindingprotein1，FUBP1）的慢病毒载体LV-FUBP1-RNAi，转染胃癌SGC-7901细胞，探讨应用RNA干扰技术抑制FUBP1基因的表达对人胃癌细胞增殖、细胞迁移、细胞周期和凋亡等生物学功能的影响，初步评价FUBP1基因沉默在胃癌基因治疗中的应用价值。方法构建三组不同RNA干扰序列的慢病毒载体LV-FUBP

2、1-RNAi及阴性对照序列的慢病毒载体Negative-RNAi，通过慢病毒转染预实验选择合适的感染复数分别转染胃癌细胞SGC7901后利用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(QRT-PCR)检测FUBP1在mRNA的表达水平，筛选出有效的RNA干扰序列用于后续实验。将实验分为FUBP1-RNAi组、Negative-RNAi阴性对照组（标记为NC）和空白对照组（标记为CON），应用QRT-PCR及蛋白免疫印迹（Westernblot）检测FUBP1在mRNA和蛋白质水平的表达量。应用CCK-8法检测各组细胞增

3、殖、Transwell及划痕实验检测各组细胞迁移能力、流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况及细胞凋亡。结果成功构建了三组不同RNA干扰序列的慢病毒载体FUBP1-RNAi-KD1、FUBP1-RNAi-KD2、FUBP1-RNAi-KD3；通过慢病毒转染预实验选择MOI=30的感染复数成功转染各组胃癌SGC7901细胞并筛选出有效的RNA干扰序列FUBP1-RNAi-KD2（相对于NC组FUBP1抑制效率高达70.4%）；QRT-PCR结果显示：相对于NC组，RNA干扰组（FUBP1-RNAi-KD2）FU

4、BP1mRNA的表达量明显下调，抑制率达70.4%（P<0.05）；Westernblot结果显示：相对于NC组，RNA干扰组FUBP1蛋白质的表达量明显下调，抑制率达74.4%（P<0.05）；CCK-8结果显示：相对于NC组和CON组，RNA干扰组连续5天胃癌细胞增殖倍数降低（P<0.05）；PI-FACS细胞周期检测结果显示：相对于NC组和CON组，RNA干扰组S期细胞比例明显升高（达60.74%，P<0.05），G0/G1期和G2/M期细胞比例分别降低达30.48%（P<0.05）、8.78%（P

5、<0.05）；细胞凋亡、Transwell及划痕实验结果显示：通过RNA干扰技术沉默FUBP1基因后对胃癌SGC7901细胞凋亡和迁移无明显影响（P>0.05）。结论慢病毒载体FUBP1-RNAi-KD2介导的FUBP1基因沉默能够有效的抑制FUBP1在人胃癌SGC7901细胞系内mRNA和蛋白质水平的表达量；通过RNA干扰技术沉默FUBP1基因的表达能够抑制胃癌细胞SGC7901的增殖，影响细胞周期的分布，将细胞周期阻滞在S期，抑制细胞生长；但是对细胞凋亡及迁移能力无明显影响；通过RNA干扰技术特异而有

6、效的沉默FUBP1基因在胃癌的基因治疗中具有一定的价值。关键词RNA干扰；慢病毒转染；远端上游元件结合蛋白1；胃癌；基因治疗·英文论著摘要·TheeffectofRNAinterferenceinhibitingFUBP1geneexpressiononthebiologicalfunctionofhumangastriccancercelllineSGC7901ObjectiveThispaperaimedtoconstructFUBP1-RNAilentiviralvectortotransfecti

7、ntohumangastriccancercelllineSGC7901andinvestigatetheeffectofinhibitingFUBP1geneexpressiononthebiologicalfunctionofgastriccancercellproliferation,metastasis,cellcycleandapoptosis.Throughthisstudy,wecanevaluatethevalueofFUBP1genesilencinginthetreatmentofga

8、striccancer.MethodsTodesignFUBP1-RNAilentiviralvectorwiththreedifferentkindsofRNAinterferencesequencesandNegative-RNAilentiviralvectorwithnegativecontrolsequence.ThenchoicethereasonableMOIviapreliminaryexperimentofl