生物药物的分离纯化ppt课件.ppt

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1、生物药物的分离纯化许多生物药物都具有生物活性，这些药物具有下列特点：（1）生理活性高、副作用小（2）稳定性差（3）对其质量、纯度要求高因此，为了获得合格的目的产物，必须建立与上述特点相适应的生物药物的分离纯化工艺。一、生物药物的特点：一般分为5个步骤，包括预处理、固液分离、浓缩、纯化和产品定型。二、分离纯化的基本过程生物药物提取工艺流程的基本模式：发酵或培养预处理细胞分离细胞破碎细胞碎片分离收集上清液或包涵体初步纯化高度纯化成品加工三、分离纯化的技术分离纯化技术应满足下列要求：（1）技术条件要温和（2）选择性要好（3）收率要高（4）两个技术之间要能直接衔接（5）整个分

2、离纯化过程要快1、细胞破碎与固液分离：有细胞收集、细胞破碎和细胞碎片分离等步骤。（1）细胞收集：细胞收集常用的是离心分离的方法，膜过滤法液逐步得到广泛应用。（2）细胞破碎：有机械破碎法和非机械破碎法。机械破碎法：高压匀浆法、超声破碎法、高速珠磨法、高压挤压法非机械破碎法：酶溶法、化学渗透法、热处理法、渗透压冲击法等。（3）固液分离：离心沉淀是固液分离的主要手段，包括高速离心和超速离心。常用的膜过滤技术有微滤、超滤和反渗透等。2、目的产物的分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术分为离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱。亲和色谱、凝胶色谱、高压液相色谱等。蛋白质纯化方法的设计

3、通常是根据产物分子的物理、化学参数和生物学特性进行的。选择纯化方法应根据目的蛋白质和杂蛋白的物理、化学和生物学方面性质的差异，尤其重要的是表面性质的差异。（1）离子交换色谱（ionexchangechromatography,IEC）基本原理是通过带电的溶质分分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。蛋白质的等电点和表面电荷的分布主要影响其离子交换的性能，影响蛋白质离子交换色谱保留的其他因素，还有交换基团和交换介质的种类、吸附和洗脱的条件等。（2）反相色谱（reversedphasechromatography,RPC）和疏水色谱（hydrophob

4、icinteractionchromatography,HIC）反相色谱和疏水色谱是根据蛋白质疏水性的差异来分离纯化的。（3）亲和色谱（affinitychromatography,AC）亲和色谱是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附的。亲和色谱的过程大致分为3步：第一步配基固定化;第二步吸附目的产物；第三步样品解吸。（4）凝胶过滤色谱凝胶过滤是以具有空隙大小一定的多孔性凝胶作为分离介质，小分子能进入孔内，在柱中缓慢移动，而大分子不能进入孔内，快速移动，利用这种移动差别可使大分子与小分子分开。3、非蛋白质类杂质的去除非蛋白质类杂质不应忽视，在纯化过程

5、中，需特别注意3种可能存在的非蛋白类杂质，它们是DNA、热原质和病毒。（1）DNA的去除（2）热原质的去除（3）病毒的去除四、选择分离纯化方法的依据1、根据产物表达形式来选择2、根据分离单元之间的衔接选择3、根据分离纯化工艺的要求来选择