球菌的培养与鉴定(实验)ppt课件.ppt

《球菌的培养与鉴定(实验)ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、球菌的培养与鉴定苏州大学附属第二医院刘婷婷实验目的1实验内容2实验材料3操作步骤4实验结果5一、实验目的掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属的菌落特点、染色形态及鉴别实验；了解其它球菌的菌落特点、染色形态及鉴别。二、实验内容金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌葡萄球菌属肺炎链球菌化脓性链球菌无乳链球菌链球菌属粪肠球菌肠球菌属葡萄球菌属（一）菌落特征（血琼脂平板）金黄色葡萄球菌奶油样金黄色，中等偏大，圆形，轻微凸起，光滑，半透明，明显的β溶血环表皮葡萄球菌灰白色，中等偏小，圆形，光滑，半透明，大多数不溶血金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征表皮葡萄球菌

2、在血平板上的菌落特征葡萄球菌属（二）形态与染色性革兰阳性球菌，直径为0.5~1.5µm，成单、双、短链或不规则葡萄串状排列。葡萄球菌属（三）生化反应1、触酶：葡萄球菌属（＋）VS链球菌属（－）2、葡萄糖O/F试验：葡萄球菌属（发酵型）VS微球菌属（氧化型/无反应）触酶试验123方法结果原理挑取单个菌落，置于洁净玻片上，滴加3%过氧化氢溶液数滴，立即观察结果。有些细菌具有过氧化氢酶，能分解过氧化氢生成水，释放初生态氧，生成氧分子而出现气泡。10秒内有大量气泡产生者为阳性，不产气泡为阴性。葡萄球菌阳性，链球菌阴性。注意血平板！葡萄球菌属凝固

3、酶甘露醇脲酶蕈糖乳糖甘露糖麦芽糖蔗糖金葡＋＋d＋＋＋＋＋表葡－－＋－d(＋)＋＋3、属内鉴定d：11%~89%为阳性；()：为延迟反应血浆凝固酶试验123方法结果原理试管法：取试管加入0.5ml血浆，再加入3~5个待检菌落，充分研磨混匀。置35℃大气环境中4小时，观察结果。金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶（结合型、游离性），使血浆中可溶性纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，使血浆凝固。试管中血浆凝固成胶冻状，为阳性；反之血浆不凝固仍流动的，为阴性。金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性。链球菌属（一）菌落特征（血琼脂平板）肺炎链球菌灰色，较小，α

4、溶血，“脐窝”状凹陷，有荚膜菌株可成粘液样化脓性链球菌（A群）灰白色，较小，半透明，无/有光泽，周围有较大的β溶血环无乳链球菌（B群）灰白色，较A群大，平坦，有光泽，不透明，周围有狭窄的β溶血环肺炎链球菌在血平板上的菌落特征链球菌属（二）形态与染色性革兰阳性球菌，圆形或卵圆形，成双、链排列，链的长度因菌种和培养基而有明显差异，一般在液体培养基中易形成长链。肺炎链球菌为矛头状，成双排列，有荚膜的革兰阳性球菌。链球菌属（三）生化反应1、β溶血型链球菌鉴别试验杆菌肽CAMP试验化脓性链球菌S－无乳链球菌R＋杆菌肽敏感试验123方法结果原理挑取

5、2~3个菌落，密集涂布于血琼脂平板上，用镊子将杆菌肽纸片贴于平板上，35℃大气环境孵育18~24小时后观察结果。化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，其他链球菌通常耐药。在杆菌肽纸片周围出现抑菌环为敏感菌，推断为A群化脓性链球菌。CAMP试验123方法结果原理在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线，再将被检菌距金葡菌接种线3~4mm处呈直角接种一短线，35℃培养18~24小时后观察结果。B群链球菌能产生可扩散的细胞外蛋白“CAMP”因子，该物质可促进金葡菌β溶血素活性，故在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。在两

6、种细菌划线交界处出现箭头状透明溶血环区为阳性，否则为阴性。CAMP试验链球菌属2、肺炎链球菌Optochin敏感试验：＋胆汁溶菌试验：＋荚膜肿胀试验：＋分解菊糖Optochin敏感试验123方法结果原理挑取2~3个菌落，密集涂布于血琼脂平板上，用镊子将Optochin纸片贴于平板上，35℃5%CO2环境孵育18~24小时后观察抑菌环。Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制细菌生长，故肺炎链球菌对其敏感。抑菌圈直径≥14mm为敏感，推断为肺炎链球菌；抑菌圈直径＜14mm时，参照胆汁溶菌试验；无抑菌圈出现为耐药。Optochin敏感

7、试验胆汁溶菌试验123方法结果原理平板法：于待检菌落上加一滴100g/L去氧胆酸盐溶液，35℃大气环境孵育30分钟后观察结果。试管法：在1ml细菌血清肉汤培养液中加入20g/L去氧胆酸钠溶液0.1ml，35℃水浴30分钟后观察结果。胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜的破损或菌体裂解而自溶。平板法：若菌落消失为阳性，不消失为阴性。试管法：若液体由浑浊变透明为阳性，不变为阴性。胆汁溶菌试验肠球菌属（一）菌落特征（血琼脂平板）灰白色，较小，不透明，表面光滑，菌落周围多有α溶血，也可无溶血环或β溶血（一般在兔血、马血或人血平板上

8、出现，羊血平板上不会出现）。肠球菌属（二）形态与染色性类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。肠球菌属（三）生化反应（粪肠球菌为例）触酶阴性胆汁七叶苷阳性6.5%NaCl肉汤中能生长精氨酸