2015年微生物检验技术培训ppt课件.ppt

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1、微生物检验技术1微生物检验技术一、环境监测二、无菌检查三、微生物限度检查2一、环境监测无菌检查实验环境的修订修订依据及意义：2010版GMP附录一«无菌药品»和附录三«生物制品»中均规定，非最终灭菌产品各工序关键操作环境应为B级背景下的A级。无菌检查的洁净环境不得低于生产关键区的洁净环境要求！3一、环境监测微生物限度检查实验环境的修订4一、环境监测GMP2010年版对洁净度的规定及确认标准5一、环境监测药品洁净实验室监测项目及频次（参考）6一、环境监测培养基胰酪大豆胨琼脂（TSA）细菌、酵母菌和霉菌的生长必要时可加入添加剂消

2、除和减少消毒剂和抗生素的作用。，沙氏葡萄糖琼脂(SDA)（当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时）培养时间：ChP(2015)GB/T16293-2010TSA:3-5天不少于2天SDA:5-7天不少于5天7二、无菌检查总则：环境、设备、人员培养基：品种、制备、灭菌、贮存、适用性检查方法适用性试验：直接接种法、薄膜过滤法供试品的无菌检查：供试品的处理、对照试验、直接接种法、薄膜过滤法、培养及观察结果判断8二、无菌检查1.总则1）对象：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的

3、一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。9二、无菌检查2）环境：应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，（《9203药品微生物实验室质量管理指导原则》:环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行）【10版：应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行】，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。A级和B级区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器（HEPA）。1

4、0二、无菌检查3）人员：【10版：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。】15版删除。11二、无菌检查2、培养基12二、无菌检查2.培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养。胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。1）培养基的制备及培养条件配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。13二、无菌检查2）培养基适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨

5、液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。14二、无菌检查2）培养基适用性检查无菌性检查:每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。灵敏度检查菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。菌液：浓度<100cfu/ml接种：2管+菌液，1管空白结果判断：+菌液----生长良好空白----无菌生长15二、无菌检查2灵敏度检查菌液

6、制备:取菌种新鲜培养物接种至相应培养基，培养。上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。16二、无菌检查2培养基灵敏度检查培养基接种:取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种相应菌液。逐日观察结果。结果判定:空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。17二、无菌检查3.方法适用性试验（方法验证试验）当进行产品无菌检查法时，应进行方法适用性试验，以确认所采用

7、的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行。18二、无菌检查4.供试品的无菌检查无菌检查法包括薄膜过滤法直接接种法只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。19二、无菌检查4.供试品

8、的无菌检查阳性对照 应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于1