HIV实验室检测技术ppt课件.ppt

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1、HIV实验室检测技术艾滋病实验诊断技术HIV抗体测定抗原测定核酸测定病毒分离CD4淋巴细胞计数窗口期定义从HIV感染到HIV抗体被检出的时间,一般为六周到十二周决定因素初筛试剂质量和测试技术机体免疫反应病毒特性-窗口期无法避免急性期潜伏期窗口期HIV感染以后的血清学动态Anti-P24Anti-gp41/120(anti-gp36)HIVRNAAnti-Ag感染1周2周3周4周………………….1年2年3年…………….10年………..艾滋病期Anti-Ab浓度HIV抗体检测的目的和要点HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测

2、、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。初筛实验室设备条件独立实验室用房，建筑设备和仪器要符合要求II级生物安全实验室酶标仪，洗板机，精确移夜管，专用冰箱，离心机，水浴箱，温箱等消毒和污染处理设施安全防护设施艾滋病检测方法的意义HIV抗体筛查检测HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将该标本送确证实验室进行确证。HIV抗体确认检测（免疫印迹试验）---HIV/AIDS诊断的唯一依据--

3、-艾滋病确认实验室负责HIV核酸检测辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。指导治疗方案及疗效测定。预测疾病进程。抗体检测根据检测HIV感染后产生的HIV抗体的间接指标而发展起来的血清学诊断技术，分为初筛试验和确认试验。初筛试验用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能会有假阳性，不能发抗体阳性报告确认试验确定检测对象是

4、否有HIV抗体，可发抗体阳性报告酶联免疫试验(ELISA)最早用于检测血清中HIV抗体的有效筛检方法很高的敏感性和特异性根据检测方法，可分成4类间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和检测方式可分为四代筛查试验筛查试剂经国家食品药品监督管理局注册批准在试剂有效期内酶联免疫试剂应批批检合格临床质量评估敏感性和特异性高第一代ELISA试剂包被抗原：全病毒裂解抗原窗口期：6-8星期优点：灵敏度高，可检出各种抗体缺点：制备麻烦，成本高，假阳性1985年，FDA批准第一个HIV抗体筛选试剂第二代ELISA试剂包被抗原：重组抗原、合成多肽窗口期：4-5星期优点：重组

5、抗原可消除HLA（人类白细胞抗原）所致的抗体假阳性，生产成本低，不使用HIV病毒颗粒，较为安全，敏感性特异性较高缺点：仍有一定的假阳性1990年，FDA批准第一个重组抗原筛选试剂第三代ELISA试剂包被抗原：重组抗原加合成多肽合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高窗口期：3星期左右优点：可检测所有不同种类的抗体，增加了试剂的敏感性和特异性1994年发展了双抗原夹心法，酶标物由抗人IgG改变为特异性HIV抗原第四代ELISA试剂包被物：重组或多肽抗原+重组抗体窗口期：2星期左右优点：同时检测HIV抗原抗体，缩短窗口期注意：抗原

6、检测敏感性低于单独抗原试剂(50~70pg/ml,5~10pg/ml)1998年第四代试剂首次上市HIV抗体试剂盒进展代次抗原方法检测时间1全病毒间接>2个月2重组或多肽间接3-4周3重组+多肽夹心2-3周4抗原+抗体夹心2周左右筛查样品HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）明胶颗粒凝集试验（PA）免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验免疫层析试验酶联免疫吸附－－ELISA方法间接法夹心法－－双抗原和双抗体竞争法捕获法间接ELISA方法Ag+Ab+Ab-E酶标记抗

7、人IgG标本中的HIV抗体底物酶产生颜色HIV抗原固体载体双抗原夹心法Ag+Ab+Ag-E标本中HIV抗体HIV抗原酶标的HIV抗原双抗原夹心法Ag+Ab+Ag-E用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。HIV第三代试剂都是运用此法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。试剂的平衡在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰