hiv检测技术-精品ppt课件

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1、HIV检测技术艾滋病实验诊断技术HIV抗体测定抗原测定核酸测定病毒分离CD4淋巴细胞计数急性期潜伏期窗口期HIV感染以后的血清学动态Anti-P24Anti-gp41/120(anti-gp36)HIVRNAAnti-Ag感染1周2周3周4周………………….1年2年3年…………….10年………..艾滋病期Anti-Ab浓度HIV抗体检测的目的和要点HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查

2、。以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。初筛实验室设备条件独立实验室用房，建筑设备和仪器要符合要求II级生物安全实验室酶标仪，洗板机，精确移夜管，专用冰箱，离心机，水浴箱，温箱等消毒和污染处理设施安全防护设施艾滋病检测方法的意义HIV抗体筛查检测HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将该标本送确证实验室进行确证。HIV抗体确认检测（免疫印迹试验）---HIV/AIDS诊断的唯一依据---艾滋病确认实验室负责HIV核酸检测辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确

3、定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。指导治疗方案及疗效测定。预测疾病进程。抗体检测根据检测HIV感染后产生的HIV抗体的间接指标而发展起来的血清学诊断技术，分为初筛试验和确认试验。初筛试验用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能会有假阳性，不能发抗体阳性报告确认试验确定检测对象是否有HIV抗体，可发抗体阳性报告酶联免疫试验(ELISA)最早用于检测血清中H

4、IV抗体的有效筛检方法很高的敏感性和特异性根据检测方法，可分成4类间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和检测方式可分为四代筛查试验筛查试剂经国家食品药品监督管理局注册批准在试剂有效期内酶联免疫试剂应批批检合格临床质量评估敏感性和特异性高第一代ELISA试剂包被抗原：全病毒裂解抗原窗口期：6-8星期优点：灵敏度高，可检出各种抗体缺点：制备麻烦，成本高，假阳性1985年，FDA批准第一个HIV抗体筛选试剂第二代ELISA试剂包被抗原：重组抗原、合成多肽窗口期：4-5星期优点：重组抗原可消除HLA（人类白细胞抗原）所致的抗体假阳性，生产成

5、本低，不使用HIV病毒颗粒，较为安全，敏感性特异性较高缺点：仍有一定的假阳性1990年，FDA批准第一个重组抗原筛选试剂第三代ELISA试剂包被抗原：重组抗原加合成多肽合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高窗口期：3星期左右优点：可检测所有不同种类的抗体，增加了试剂的敏感性和特异性1994年发展了双抗原夹心法，酶标物由抗人IgG改变为特异性HIV抗原第四代ELISA试剂包被物：重组或多肽抗原+重组抗体窗口期：2星期左右优点：同时检测HIV抗原抗体，缩短窗口期注意：抗原检测敏感性低于单独抗原试剂(50~70

6、pg/ml,5~10pg/ml)1998年第四代试剂首次上市HIV抗体试剂盒进展代次抗原方法检测时间1全病毒间接>2个月2重组或多肽间接3-4周3重组+多肽夹心2-3周4抗原+抗体夹心2周左右Closingthewindow4thgen3rdgen=>=>1st-2ndgenHIVantigenIgMabIgGabDetectionlimit<=window第一/二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测IgG、IgM抗体,第四代试剂同时检测IgG、IgM抗体和P24抗原使窗口期缩短。筛查样品HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和

7、尿液样品。唾液检测试剂在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可以同时检测HIV－1/HIV－2抗体，原理为酶免间接法。ELISA、免疫印迹法（WB）已经美国FDA批准优点:1.样品稳定,各种温度下稳定性大于三周2.敏感性和特异性与标准的血清学实验相当缺点:1.预处理复杂，重复性较差2.会出现不同于血清抗体的种类和滴度尿液检测试剂适用对象：静脉吸毒人群，其他高危人群的大面积流调、监测优点：1.采集、处理费用低，较血液标本安全2.HIV抗体在尿中十分稳定，尿液中IgG与血液相当缺点：1.检测时间长2.精确性低于血、唾液，阳性者需作血清学检测筛