医学微生物学与免疫学.doc

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1、.医学微生物学与免疫学实验指导（供医疗、护理、口腔、药学等专业用）主编：效祥班级：学号：：万杰医专微免教研室编制2007年6月12日....目录实验项目一细菌形态及结构观察…………………3实验项目二细菌形态学检查法……………………4实验项目三细菌的分布……………………………6实验项目四细菌的消毒及药敏试验………………7实验项目五血型抗原检测…………………………9实验项目六免疫球蛋白的测定……………………10实验项目七细菌凝集反应…………………………12实验项目八琼脂双扩散试验………………………13....实验一细菌形态及结构观察一、实验目的1、熟悉显微镜油镜的使用方法，学生能独立用油镜观

2、察细菌标本。2、认识细菌的基本形态及特殊结构----鞭毛、荚膜、芽胞等。二、实验容1、显微镜油镜的使用方法及维护2、细菌形态及结构观察三、实验仪器、设备及材料1、显微镜2、标本（鞭毛、荚膜、芽胞、葡萄球菌、链球菌等）四、实验原理细菌较小，肉眼不能直接观察，通过显微镜放大1000倍后观察细菌的形态结构五、实验步骤1、显微镜油镜使用由指导教师讲解、演示、学生自己操作2、细菌的基本形态观察—个人操作个人使用油镜观察细菌中的球菌、杆菌、弧菌等形态标本片。3、细菌的特殊结构观察—示教认真观察示教标本——芽孢、荚膜及鞭毛形态。六、实验报告要求绘出观察到的细菌形态及结构图。七、实验注意事项1、显微镜的

3、正确使用2、避免压碎标本片和损坏镜头....八、思考练习1、如何正确使用显微镜的油镜观察细菌2、绘制出细菌常见的形态与结构实验二细菌形态学检查法一、实验目的1、熟悉细菌涂片的制作。2、掌握革兰氏染色法。二、实验容1、细菌涂片制作2、革兰氏染色法三、实验仪器、设备及材料1、菌种（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）、取菌环、玻璃片、生理盐水、酒精灯2、搪瓷盆、支架、冲洗瓶、染液（结晶紫或龙胆紫、碘液、95%酒精、稀释复红）四、实验原理1、G+菌细胞壁结构较致密,含脂类少,乙醇不易透入,95%乙醇可使细胞壁脱水,细胞间隙缩小,通透性下降,阻碍结晶紫和碘的复合物渗出;而G-菌的细胞壁结构较疏松,含脂类量

4、多.易被乙醇溶解,致使细胞壁通透性增高,细胞的结晶紫和碘的复合物易被溶出而脱色.2、G+菌含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不易被脱色，G-菌含核糖核酸镁盐少，易被脱色。3、G+菌等电点（PH2-3）比G-菌等电点（PH4-5）低，在同一PH染色环境中，G+菌比G-菌带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易脱色。....五、实验步骤1、细菌涂片制作—个人操作（1）、取洁净载玻片一，于中心滴加生理盐水一小滴（2）、用铂金耳以无菌手续取菌少许，涂于生理盐水中，使成1cm2左右微混浊菌液，待干。（3）、将涂片通过火焰三次，固定菌膜即成。2、染色（1）、

5、初染加结晶紫染液于涂片上,染一分钟后,用水洗去染液.（2）、媒染加碘液染一分钟,水洗.（3）、脱色加95%乙醇,不时摇动30秒,至无紫色脱落为止,水洗.（4）、复染加稀释石炭酸复红液一分钟,水洗,干后镜检.六、实验报告要求记录涂片及染色过程及观察结果。七、实验注意事项（1）、染色结果常受操作者技术影响,尤其是容易过度脱色,往往阳性染成阴性.（2）、在同一载玻片上,需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作革兰阳性及阴性对照.（3）、染色关键在于涂片与脱色,涂片不宜过厚,固定不宜过热,脱色不宜过度.（4）、菌龄为18～24小时为佳.八、思考练习1、涂片的制作方法及革兰氏染色法的步骤2、革兰氏染色

6、法的意义....实验三细菌的分布一、实验目的1、了解细菌在自然界及正常人体皮肤上的分布情况，树立无菌观念。2、熟悉细菌的培养方法二、实验容1、细菌在自然界的分布：空气、水、土壤中细菌的培养。2、正常人皮肤细菌培养。三、实验仪器、设备及材料普通固体培养基、取菌环、试管、吸管、恒温培养箱四、实验原理培养基、恒温箱为细菌提供合适的生长繁殖的条件，使细菌能够繁殖，根据菌落的多少来判断空气、水、土壤中细菌和正常人皮肤细菌的多少。五、实验步骤1、细菌在自然界的分布—小组集体操作（1）、空气培养取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称后，敞开培养基在空气中暴露10分钟，盖好后送37ºC培养箱

7、中培养，24小时后看结果。（2）、水培养取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称，以吸管吸取自来水0.1毫升，以无菌手续加入培养基中，再以接种环涂匀，放培养箱培养，24小时后看结果。（3）、土壤培养....取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称，再取小试管一支，加无菌盐水1毫升，取土壤一小粒放入盐水中摇匀，以无菌吸管吸取上清液0.1毫升注入培养基，再以接种环涂匀，放培养箱培养，24小时后看结果。2、正常人皮肤细