临床微生物学和微生物学检验ppt课件.ppt

《临床微生物学和微生物学检验ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第二章细菌感染实验诊断疾病的种类不断发生变迁，传染病如鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌引起的内源性感染却明显增多。同时，新的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、耐药等又重新流行。目前，临床遇到主要是条件致病菌，引起的感染。正常菌群与病原菌的致病性是相对的，因此，既不要轻易认为分离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易认为所发现的细菌就是该感染的病原菌，必须结合临床进行进一步的诊断。第一节临床感染性疾病实验诊断要求一、诊断的目的1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴定到细菌的种。2.为提供治疗方案为目的，要进行临床标本的直接药物敏感

2、试验。3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。4.以了解细菌与感染的关系为目的,应该做细致的鉴定。二、诊断试验的选择1.选择有鉴定价值的试验。2.选择简易、快速、方便的试验，达到目的即可。3.综合考虑试验的敏感性和特异性。敏感性=阳性结果数/感染病人数，越高假阴性就越少。特异性=阴性结果数/未感染病人数，越高假阳性就越少。三、常用诊断流程1.双歧索引用于相互区别比较容易,有特征的细菌，如革兰阴性杆菌初步分群；对于相互区别较难的细菌，鉴定项目较多,用起来不太方便。2.表解法：将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显

3、，便于分析比较。此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。3.数字编码鉴定法将所得生化反应模式转化成数学模式，可把细菌生化反应结果转化成数字，经检索手册又可将转化成细菌名称。与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系统。组别试验项目代码结果结果代码总值1硫化氢苯丙氨酸葡萄酸盐421--+00112靛基质甲基红枸橼酸盐421-++02133尿素动力产气421+++42174赖氨酸鸟氨酸棉子糖421++-42065山梨醇侧金花醇木胶糖421++-4206第二节临床标本的采集与处理一、标本采集的一般原则1.病程早

4、期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。2.无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。3.根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。4.注意在不同病程采集不同部位标本。5.采集标本时要防止传播和自身感染。二、标本的处理1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可

5、直接用抽取标本的注射器运送。第三节细菌形态学检查一、显微镜1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用于免疫荧光技术中。5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后者适于对细菌表面结构及附件观察。二、不染色细菌标本检查1.主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。可对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱菌。2.螺旋体

6、由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。三、细菌染色标本的检查细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。(一)常用染料分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。1．碱性染料电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。由于细菌均带负电荷，易与染料结合而着色。常用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。2．酸性染料电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。3．

7、复合染料(中性染料)及荧光染料复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。这些染色常用于某些特殊的染色技术中。（二）常用的染色方法在细菌感染标本的检查中，临床上常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色和荧光染色。1．革兰染色最经典、最常用的染色方法。在分离培养前都要进行革兰染色、镜检。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细菌，有助于进一步鉴定。结合细菌特殊结构及排列方式，对病原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断及治疗提

8、供了依据。革兰染色可为临床选择用药提供参考，帮助临床制订有针对性的治疗方案。因为G+菌和G-菌对抗生素敏感性不同，且致病物质及其作用机理也不同。2．抗酸染色将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两大类。因为大多数病原菌为非抗酸性，所以抗酸染色不作为常规检查项目。只用于结