第六章-微生物的生长及其控制ppt课件.ppt

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1、第六章微生物的生长及其控制MicrobialGrowthandControl第一节测定微生物生长繁殖的方法第二节微生物的生长规律第三节影响微生物生长的主要环境因素第四节微生物培养法概论第五节微生物生长繁殖的控制单个微生物细胞合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。同化作用的速度超过了异化作用个体的生长原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加如果各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，引起个体数目的增加。群体内各个个体的进一步生长群体的生长第一节测定微生物生长繁殖的方法微生物生

2、长的测定：个体计数、群体重量测定和群体生理指标测定。目的：评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响；评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果；客观地反映微生物生长的规律。一、测生长量：单位时间里微生物重量上的变化。（一）直接法（精确的称干重法；粗放的测体积法）（二）间接法（比浊法，生理指标法）（一）直接法将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干（干燥温度可采用105℃、100℃或80℃）、称重。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13

3、g。该法适合菌液浓度较高的样品。（二）间接法1、比浊法：借助于分光光度计，在一定波长（450~650nm波段)下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。原理：在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。特点：快速、简便。如何定量二者关系呢？浊度仪①绘制标准曲线②测菌液浊度，对照标准曲线得出细菌数量2、生理指标法测含氮量：蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。其他方法：含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、

4、消耗底物量、产CO2、产酸、产热、粘度等，都可用于生长量的测定。二、计繁殖数（单细胞微生物细胞个体数目的检测法）（一）直接法：血球计数板（二）间接法：（活菌）平板菌落计数法、厌氧菌培养血球计数板法:（一）直接法细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml；（二）间接法（活菌计数法）①平板菌落计数法②膜过滤培养法微生物生长测定方法比较测定细胞数目方法特点与应用血球计数板法较快速简便，但较费时薄膜过滤染色法快速简便，适于含菌数很低的空气、水等中的总菌计数平皿菌落计数法简易价廉，但花费时间较长，不能

5、立刻知道结果测定物质量比浊法快速简便，敏感度低，适于不发酵液或液体中的快速总细胞数估计，但需事先标定细胞湿重法较为简便，但含水量不定，准确度差细胞成分含量法如测定蛋白质、核酸、还原糖的含量等细胞干重法较为费时，易受颗粒杂质干扰，敏感度低第二节微生物的生长规律一、获得微生物纯培养的方法概念：从一个细胞得到的后代称为纯培养。方法：稀释倒平板法；划线法。二、微生物的个体生长和群体的同步生长使用同步培养技术，即设法使群体中的所有细胞尽可能都处于同样细胞生长和分裂周期中，然后分析此群体的各种生物化学特征，从而

6、了解单个细胞所发生的变化。通过同步培养而使细胞群体处于分裂步调一致的状态即同步生长。进行同步分裂的细胞称为同步细胞。获得同步生长的方法获得同步生长的方法主要有两类：（1）环境条件诱导法：抗生素、变换温度、光线、培养基等，造成与正常细胞周期不同的周期变化。（2）机械筛选法：选择性过滤、梯度离心或膜洗脱法。物理方法，随机选择，不影响细胞代谢。硝酸纤维素膜法细菌细胞会粘附于具有相反电荷的硝酸纤维微孔滤膜上。三、单细胞微生物的典型生长曲线将少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气

7、（厌氧菌除外）等条件下，它们的群体会有规律地生长起来。每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，可以画出一条有规律的曲线即单细胞微生物的典型生长曲线。生长曲线代表了单细胞微生物在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。单细胞微生物的典型生长曲线延滞期指数期稳定期衰亡期又称：停滞期、调整期、适应期－“万事开头难”1、特点：生长速率常数R=0;细胞形态变大或增长;细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强;合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合

8、成加快），易产生诱导酶;对外界不良条件反应敏感（如氯化钠浓度、温度、抗生素等理、化学药物）。（一）延滞期2、在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期，措施有：①接种龄：对数生长期的菌种接种,子代停滞期短；稳定期的菌种接种，子代停滞期居中；停滞期或衰亡期菌种接种，子代停滞期长。②增加接种量；一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用1/10的接种量）。③调整培养基的成分，应适当丰富，且发酵培养基成分尽量与种子培养基的成分接近。（二）指数期1、特点：生长速率常数