第六章微生物生长及其控制ppt课件.ppt

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1、第六章微生物生长及其控制主要内容：第一节测定微生物生长的方法第二节微生物的生长规律第三节影响微生物生长的主要因素第四节微生物培养第五节微生物生长的控制微生物生长的几个概念个体生长群体生长个体数量的增加或细胞群体总质量的增加。繁殖（reproduction)：微生物个体数目的增加。群体生长=个体生长+繁殖微生物个体细胞物质、结构组分和体积有规律地、不可逆地增加。第一节微生物生长的测量细胞数目（计繁殖数）的测定细胞物质(biomass，生长量)的测定第六章微生物生长及其控制一、细胞数目的测定显微镜直

2、接计数法菌落计数法比浊法库尔特电子计数器计数法流动式细胞光度计第一节微生物生长的测量显微镜直接计数法每毫升原液所含菌体数（个）=每小方格平均菌体数×400×10×1000×稀释倍数不足：不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄一些小的细胞在显微镜下很难看到；样品中菌液浓度不能低于106个/mL不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定。第一节微生物生长的测量菌落计数法（活菌计数法）平板菌落计数法载片培养计数法微孔滤膜法第一节微生物生长的测量-细胞数量的测定平板菌落计数法灵敏度高可以区分死活细胞应用广

3、优点不足测定的结果误差也较大。操作也比较烦琐需要的时间较长第一节微生物生长的测量第一节微生物生长的测量-细胞数量的测定比浊法原理：是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光吸收值(OD)成正比，菌数越多，OD越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的OD，就可反应出菌液的浓度。特点：快速、简便；但易受干扰。细胞数目或干重与培养液浊度的关系第一节微生物生长的测量-细胞数量的测定库尔特电子计数器计数法第一节微生物生长的测量-细胞数量的测定流动式细胞光度计快速细胞计数，其计数

4、的效率可达3000个/秒分析分检第一节微生物生长的测量-细胞数量的测定二、细胞物质的测定重量法细胞沉降体积法细胞量的间接估计第一节微生物生长的测量重量法第一节微生物生长的测量-细胞物质的测定将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。该法适合菌浓较高的样品。举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/

5、ml时，100ml培养物可得10~90mg干重的细胞。细胞量的间接估计测含氮量蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。其他方法含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、产热、粘度、ATP等，都可用于生长量的测定。第二节微生物的生长规律一、微生物的个体生长和同步生长二、微生物的群体生长一、微生

6、物的个体生长和同步生长个体生长——微生物个体细胞物质、结构组分和体积有规律地、不可逆地增加。个体生长研究方法：电子显微镜超薄切片同步培养技术（synchronousculture）：设法使群体中的所有细胞尽量都处于同样的细胞生长和分裂周期中，然后分析此群体的各种生物化学特征，从而了解单个细胞所发生的变化。同步生长（synchronousgrowth）一个细胞群体中各个细胞都在同一时间进行分裂的状态，称为同步生长，进行同步分裂的细胞称为同步细胞。获得同步生长的方法环境条件诱导法：变换温度、光线、培

7、养基、加入抑制剂-解除抑制等。造成与正常细胞周期不同的周期变化。温度开始很低，使其均处在仅活着的状态——升高温度——同步生长抑制ＤＮＡ生长法：加入代谢抑制剂，阻遏DNA复制——解阻遏——同步机械法选择—收集同样大小的细胞密度梯度离心选择性滤膜法一、单细胞无分支微生物的典型生长曲线生长曲线的制作：将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测量活细胞数目。以培养时间为横坐标，以细胞增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。微生物的群体生长典型的生长曲

8、线延滞期对数期稳定期衰亡期时期的划分：按照生长速率常数（growthraceconstant，每小时分裂次数）不同☆生长曲线代表了微生物在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。其它名称：停滞期、调整期、适应期现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。生长速率常数=0个体特点：细胞形态变大或增长细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物）1.延滞期（lagphas