荧光显微镜ppt课件.ppt

《荧光显微镜ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、荧光显微镜荧光显微镜染色法根据：标本的透光率差异用于：常规明场显微镜物理法根据：折射率的差异双折射用于：相差、微分干涉和偏光显微镜荧光法根据：荧光特性用于：荧光显微镜荧光显微镜什么是荧光？当一个物体吸收了紫外光或者短波光的能量，它能发射出比原来吸收的波长更长的光的特性。这种现象称为“荧光”或“磷光”。荧光显微镜荧光的特性：一.为了能发射出荧光，一种物质必须能吸收进一种光线。二.通常，荧光波长是长于吸收光的波长。三.每一种物质都有他特定的荧光光谱。四.通常，荧光强度总是远低于激发光。五.与激发光的方向无关，荧光向空间各个方向发射。六.荧光有衰退

2、的特性。荧光显微镜荧光染色分类：自发荧光二次荧光抗体荧光技术荧光显微镜自发荧光（不加染色）有些物质不加染色，也能发出荧光（自发荧光或原发荧光），但在医学和生物学领域中，只有很少物质具有自发荧光。荧光显微镜二次荧光（用化学染色）非荧光性的物质（蛋白质、炭水化合物）用荧光色素染色，由荧光色素产生荧光（二次荧光），以便进行观察。对特定物体选择合适的荧光色素，该物体就能和周围的组织或细胞区别出来而可以观察到。荧光显微镜抗体荧光技术（用免疫染色）利用特定的抗原必然和特定的抗体相结合这一个事实，有意识地使带荧光标记的抗体和标本中的抗原进行抗原/抗体反应，

3、这样两者的结合体就能通过抗体的荧光观察到。荧光显微镜荧光显微镜的原理荧光显微镜光源：光源辐射出各种波长的光。由于荧光和激发光相比，是非常微弱的，因此荧光显微镜的光源强度必须很高，即使在近紫外区，也必须有足够的强度。为了满足这些要求，通常采用高压汞灯，但有时为了特殊需要，也采用卤素灯。荧光显微镜荧光激发滤色块透过能使标本产生荧光的特定波长的光，同时阻挡对激发荧光无关的光。几种主要的荧光激发滤色块荧光显微镜荧光标本：一般用荧光色素染色或免疫荧光的方法。阻挡滤光镜：阻挡掉没有被标本吸收的激发光，有选择地透射荧光。在荧光中也仅有部分波长被选择透过。荧

4、光显微镜光学暗视场：通常荧光的强度和激发光相比，是极微弱的，如果荧光和激发光相叠加，反差就会极度减弱。因此，必须把激发光和荧光彻底地分离出来。荧光显微镜荧光显微镜的分类：一.透射荧光显微镜：光源：高压汞灯或卤素灯。聚光镜：使用暗场聚光镜，使激发光和荧光分离出来。物镜：可用任何种类的物镜。标本：因为是透射观察，薄的标本比较适合。荧光显微镜透射荧光显微镜优点：由于用了暗场聚光镜，激发光不能进入物镜，因此容易形成暗的背景，得到良好的反差。由于上述同样的原因，任何物镜都可用于观察。用低倍物镜时，比反射荧光显微镜更亮。荧光显微镜透射荧光显微镜缺点：必须

5、正确调整聚光镜中心和高度，否则不能获得明亮的荧光像。由于暗视场聚光镜焦距限制，不能使用厚的载玻片。视场照明区不能过大，否则容易使荧光标本荧光色衰褪。厚的或不透明的标本不适用。反射荧光显微镜的光学原理荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜的分类：二.反射荧光显微镜：光源：高压汞灯或卤素灯。聚光镜：因为物镜作为聚光镜，所以不需要聚光镜。物镜：所用的物镜必须能透过足够的紫外光，而且本身不产生荧光，对数值孔径没有限制。标本：厚的标本或不透明的标本都能观察。荧光显微镜反射荧光显微镜优点：由于物镜兼作聚光镜，不需要很多调节。采用柯拉照明法，可利用孔径光阑和视场光

6、阑的效果。物镜数值孔径不受限制，在高放大被率时，也可以获得高分辨率的像。厚的或不透明的标本也能观察，厚的盖玻片也能使用。其它观察法也能与反射荧光结合使用，特别和相差法和透射微分干涉差法相结合。可以避免不必要的荧光色衰褪现象。荧光显微镜反射荧光显微镜缺点：在用低倍率物镜时，像比较暗，因此必须用大数值孔径的物镜。滤光镜系统必须有效地分离开激发光和荧光。荧光显微镜荧光显微摄影技术选用正确的激发滤色块采用柯勒照明法曝光时一般采用1%点测光摄影采用高感度软片荧光显微镜荧光显微摄影技术荧光有衰退的特性视场光阑和光闸的使用照相系统的使用标本和底片的正确保存

7、荧光显微镜需特殊的设备。一般用手动曝光。荧光显微数码摄影技术荧光显微镜荧光显微镜谢谢!