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时间：2020-09-07
《西安交通大学 荧光显微镜原理与操作课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、荧光显微镜（以OlympusIX71为例）生命科学与技术学院孙书洪2017-10-10数值孔径数值孔径：描述了物镜收光锥角的大小，从而决定了显微镜收光能力和空间分辨率数值孔径(NA) =n(sinµ)，其中角μ是二分之一的数值孔径角（A），n为透镜工作介质的折射率水浸物镜、油浸物镜科勒照明科勒照明是一种比较理想的透射光照明方式。透射光照明器的灯丝在通过聚光镜和孔径光栏后，在聚光镜的后焦平面成像，从而使样品获得均匀明亮的照明，且视野不会受到灯丝像的干扰科勒照明是获得好的透射光图像的基础，如果发现视野内样品的亮
2、度明暗不均或分辨率较差，可考虑进行柯勒照明的调节（光轴中心调节）光和电磁波的能量关系荧光原理不同颜色的荧光荧光染料光谱图常用荧光染料最大激发及发射波长荧光显微镜针对不同的荧光物质提供特定波段的激发光对产生的荧光进行收集处理成像荧光显微镜的结构荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤镜、二向色镜和阻断滤镜等)组成。荧光光源：高压汞灯50－200W滤色系统：激发滤镜：置于光源与物镜之间，用于选择激发光范围，让能激发荧光染料发光的特定波长的光通过。阻断滤镜：物镜和目镜之间，选择性通过
3、特异的荧光，呈现专一的荧光色彩。二向色镜:兼有透射长波光线和反射短波光线的功能。在荧光显微术中承当色光的“分流”作用。荧光显微镜分类根据照明方式的不同，荧光显微镜分为落射式荧光显微镜和透射式荧光显微镜两种。目前常用的是落射式荧光显微镜。落射式荧光显微镜光路图落射式荧光显微镜光路图透射式荧光显微镜光路图荧光显微镜分类根据显微镜的结构不同，分为正置荧光显微镜（组织切片等样品）和倒置荧光显微镜（培养皿中的细胞样品）两种。OlympusBX51（正置显微镜）荧光显微镜内部结构OlympusBX51（正置显微镜）Ol
4、ympusIX71（倒置显微镜）OlympusIX71（倒置显微镜）荧光显微镜使用注意事项打开汞灯5-10min稳定后再观察。荧光淬灭(光漂白)：激发光长时间照射会发生荧光减弱或消失，操作时注意不要长时间照射标本。汞灯关闭后需冷却30min后再重新启动（最好不要短时间内反复开关，标本应集中观察。）载物台前方黄色遮光板：最好不直接用肉眼看激发光，以防短波光中的紫外伤害。荧光显微镜使用注意事项课后作业1.普通荧光显微镜与激光共聚焦显微镜的区别？2.明场、相差和微分干涉差（DIC）的区别？谢谢！
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