最新《超分辨荧光显微镜技术》细胞成像技术小组展示ppt课件.ppt

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1、《超分辨荧光显微镜技术》细胞成像技术小组展示衍射极限超分辨荧光显微镜技术衍射极限是指一个发光点经光学系统成像，由于衍射的限制，不可能得到理想像点，而是得到一个夫朗和费衍射像。根据瑞丽判据，最小分辨率由艾里斑半径决定。r=0.61λ/NA由于数值孔径有限，分辨率最小为波长的一半！2SIM是常规荧光显微镜在匀场照明的基础上，通过改变照明光的空间结构，使记录的图像包含更多高频信息，利用特定的算法将这些信息分离出来，重构出超分辨图像。结构光照明显微镜(SIM)超分辨荧光显微镜技术3要在STED显微术中实现较高的空间分辨率，需要在

2、样品上施加光强较强的损耗光。然而，较强的损耗光强不仅会增大功耗，同时也会对荧光样品造成光漂白和光毒害。。受激发射损耗特点超分辨荧光显微镜技术一般来说，STED显微术可实现的分辨率可由以下公式表示:7荧光分子首先被特定激光照射到暗状态；然后打开激活激光，激发出稀疏单分子；记录好单分子后，利用漂白激光将其漂白接着打幵激活激光重新激发出新的单分子。如此反复，得到大量的稀疏存在图像，然利用高斯函数去拟合这些中心，这样就获得了突破衍射极限的超分辨图像。超分辨荧光显微镜技术光敏定位显微镜（PALM）81.极高的分辨率，横向分辨率可以

3、到达10nm!2.可以进行单分子轨迹追踪和单分子定量计算中。3.对荧光蛋白有要求。光敏定位显微特点超分辨荧光显微镜技术超分辨荧光显微镜技术随机光学重建显微镜（STORM）10不同的波长可以控制化学荧光分子Cy5在荧光激发态和暗态之间切换，例如红色561nm的激光可以激活Cy5发射荧光，同时长时间照射可以将Cy5分子转换成暗态不发光．之后，用绿色的488nm激光照射Cy5分子时，可以将其从暗态转换成荧光态，而此过程的长短依赖于第二个荧光分子Cy3与Cy5之间的距离．因此，当Cy3和Cy5交联成分子对时，具备了特定的激发光

4、转换荧光分子发射波长的特性．将Cy3和Cy5分子对胶联到特异的蛋白质抗体上，就可以用抗体来标记细胞的内源蛋白．应用特定波长的激光来激活探针，然后应用另一个波长激光来观察、精确定位以及漂白荧光分子，此过程循环上百次后就可以得到最后的内源蛋白的高分辨率影像随机光学重建显微技术染料超分辨荧光显微镜技术11近场光学显微镜，用孔径远小于光波长的探针代替光学镜头。当把这样的亚波长探针放置近场区域时，通过探测束缚在物体表面的非辐射场，可以探测到丰富的亚微米光学信息。近场扫描光学显微镜(NSOM)超分辨荧光显微镜技术12近场扫描光学显微

5、镜物理原理超分辨荧光显微镜技术利用平面波角谱：这是一个倏逝波，分析知U(x,y,Z)振幅随Z指数衰减，倏逝波体现物体的空间精细表面结构，空间频率越高，即物体越精细。13技术比较超分辨荧光显微镜技术显微镜优点缺点SIM设备简单，成像时间快。无侵入性，无损伤。分辨率不如其他显微镜高。STED分辨率高，成像时间快，可以实时观察和细胞内运动。由于消耗光增大功耗，同时也会对荧光样品造成光漂白和光毒害。设备复杂。PALM分辨率极高，一对一的标记可以进行单分子轨迹追踪和单分子定量计算。成像时间长，对荧光蛋白/染料有要求：高浓度，背景光

6、低，光量子产出高。STORM分辨率极高，荧光染料的定位精度和成像效果好。NSOM分辨率极高，可同时采集样品的表面形貌。基本上只能研究表面的性质，扫描时间长。14131I治疗甲状腺功能亢进症概述甲状腺功能亢进症是各种原因所致血循环中甲状腺激素水平过高而引起机体一系列病理生理改变的一种临床综合征。Graves病（简称GD）又称毒性弥漫性甲状腺肿，是甲状腺毒症最常见的一种类型，约占临床甲亢病人的80%。抗甲状腺药物、手术、和131I是临床治疗GD行之有效的方法。抗甲状腺药物疗效肯定、安全，但疗程长、复发率高。手术治疗复发率低，

7、甲状腺功能减退和留下手术瘢痕，且费用高。用131I治疗GD具有简便安全、疗效确切、复发率治疗GD已有60多年历史，国内外大量临床应用证明低、并且并发症少和费用较低等优点，是放射性核素治疗最成熟和应用最广泛的方法。（一）原理原理：碘是合成甲状腺激素的物质之一，甲状腺细胞通过钠/碘共转运子(Na+/I-synporer,NIS)克服电化学梯度从血循环中浓聚131I。GD患者甲状腺滤泡细胞的NIS过度表达，对131I的摄取明显高于正常甲状腺组织。131I衰变发射的β射线在组织内的平均射程为1毫米，所以β粒子的能量几乎全部释放

8、在甲状腺组织内，对甲状腺周围器官几乎没有影响。由于β射线在组织内有一定的射程，可产生“交叉火力”效应，是甲状腺中心部位接受的辐射剂量大于腺体边缘部分，如给予适当剂量的131I，则可以利用放射性“切除”部分甲状腺组织而又保留一定量的甲状腺组织，达到使甲状腺功能恢复正常的治疗目的。（二）适应症（1）Graves甲亢患者。