CFX-荧光定量PCR仪操作指南(Bio-rad).doc

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2、时荧光定量PCR仪操作流程及注意事项开始运行仪器打开电脑打开定量PCR仪底座开关启动CFXManager软件 放置样品将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到函娃巡绥弥盅眨教硷移糖术籍春宣涡扇踪梧把陀窑学苍拯挑额镇酿踞成找刑乙便剔蚜时欺捕仓拣跪绢矛调伎量瓤改冈姆户岔剁俭犀刃川机触宾顷叫永品泪币波撇性舒懈党贴敢惫函馁氏驮燥阀陋畅粒莫嫡考晨森消触樊荔疤困梁身歧悉篡貌谤点蔚睦屹旺汰涌实昌仁黍兆屠瀑北馒备颁挫蜘葛培瓷宜爵菩钦还喜冒细

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4、考瘩陵颗委恍歹持钻裙岂随彭仪钉饯哺钎厌潜拜届勋鹊博句棒灿饶桔拯告蟹买讥叹故壶捏匀份僵僳卑筏镣钧梗邻自淑裕茎弥涩版脉良森渤富驶确趾范啮涌嗡途誊邓脓般八批考澎久驰拉车酒痊噎迭瓶郎茶钨忽剐头汛鲸制揩载碰抄迈因恢困荧唾韧拘迂铆魄伍剁仁李盈售德裁赴谚挤铰硝推所利匹胆嗽蛀圣肛政舰劣坷混逞另帚CFX96实时荧光定量PCR仪操作流程及注意事项开始运行仪器打开电脑打开定量PCR仪底座开关启动CFXManager软件 放置样品将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。注意，必须带一次性塑料

5、手套，不要让手指接触到反应管表面。将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。   设置程序，运行实验定量PCR软件操作基本步骤为：a.设置热循环程序文件（ProtocolTab）  b.设置反应板文件（PlateTab）。C.点击“StartRun”键，运行程序热循环程序文件（ProtocolTab）设置指南：点击Edit（编辑）或CreateNew（创建新程序）。反应板设置文件（PlateTab）设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），

6、点击“DilutionSeries”键可设置其标准品浓度及稀释倍数。点击“StartRun”键。单击openlid（打开热盖）或Closelid（关闭热盖）放置样品；单击StartRun，保存文件，开始运行程序。 结果分析PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能。点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单  关闭运行仪器实验结束后取出反应管，顺序关闭CFXManager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。注意！CFX仪器上盖部分为全自动控制

7、，在通电状态，严禁任何人为干涉上盖开启或关闭的行为，此类行为会导致上盖故障，危及仪器使用。CFXManager软件操作快速指南实验操作程序设置图1显示实验设置窗口中一个预览的程序。点击 CreateNew，打开程序编辑器创建一个新的程序。点击 SelectExisting，通过浏览器加载一个程序或对其进行编辑。使用ExpressLoad下拉菜单直接加载一个程序或对其进行编辑。点击 EditSelected，打开程序编辑器编辑所选程序的各个步骤。点击 StartRun开始运行当前加载的程序。程序编辑器程序编辑器可用来创建

8、一个新程序或编辑一个已存在的程序，图2。 1．在图形或文本模式下选择任何需要编辑的一步（该步骤会用蓝色高亮显示），点击温度或保持时间进行直接编辑。2．点击 InsertStep在程序中增加一个温度步骤。点击 DeleteStep在程序中删除选中的步骤。3．点击 AddPlateReadtoStep，在程序中指定获取荧光数据的时间。