iQ5荧光定量PCR仪操作软件

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1、iQ5荧光定量PCR仪操作手册iQ5荧光定量PCR仪监控软件操作程序接通光学检测部分的电源，实验前先让系统预热30分钟，打开iCycler扩增系统（即仪器的基座），打开电脑，（显示windowsXP或2000界面），双击iQ5的软件，启动。iQ5软件有5个模块，每个模块的图像始终显示在屏幕的左侧，激活的模块背景为橙色，未激活的模块背景为灰色，每个模块再细分有此模块下的功能视窗。1．Workshop（工作模块）：用于设计反应板、程序及运行实验，选择实验文件，打开以往反应数据（用于分析）。Workshop模块包括Setu

2、p（设置）和PlateSummary（板设置概要）视窗。Setup（设置）视窗下有4个窗口：Protocol（程序）、Plate（板）、RunSet（运行设置）和DataFile（资料文件），用于选择、打开、编辑或创建新文件。在Setup（设置）视窗下，选择的Protocol（程序）和Plate（板）设置可以Run（运行），或者选择的DataFile（资料文件）可以被打开在DataAnalysis（资料分析）视窗中进行分析。2．Run-TimeCentral（运行-实时监测中心模块）：这个模块用于启动和监测实验运行。

3、当Protocol和Plate设定好之后，点击Run（运行）或RunEndPoint（终点运行）。3．DataAnalysis（数据分析模块）：这个模块包含一系列工具，可以让你对实验数据进行多种分析。在这个模块中显示Quantitative（定量）、MeltCurve/Peak（融解曲线/峰）、EndPoint（终点）、AllelicDiscrimination（等位基因区分）和GeneExpression（基因表达）分析。板编辑界面允许实验运行结束后进行板的设置，允许更正不正确的样本设置。当你从Workshop打开

4、一个已保存的数据文件，DataAnalysis会自动打开。4．Calibration（校准模块）：为了从你的实时荧光PCR实验中获得最好的数据，iQ5在安装时必须进行校准。在这个模块下，校准路径简单而易操作。校准程序包括：纯染料校准（当你增加一些新的染料时，可以进行这一操作程序）、MaskAlignment、背景和孔因子校准。5．用户文件，用户设置实验默认参数。21．Workshop窗口下有Setup和PlateSummary2个子窗口激活Setup，有4个子窗口Protocol，Plate，RunStart，Dat

5、aFile，绿色框为激活窗口1）激活Protocol，此窗口出现绿色框，点击Edit（编辑）或CreateNew（创建新程序）。点击Edit：编辑程序视窗中选择的程序，如2Step.tmo，弹出程序编辑界面，设置PCR热循环的程序（thermalprotocol），包括温度、时间、循环次数等参数的设置。3编辑程序窗口，设置读板选择显示项，点击激活点击CreateNew：出现与Edit相同的界面，同样操作。给所设定的程序命名，点击Save&ExitProtocolEditing，退出此界面。2）点击Plate，此窗口出

6、现绿色框，点击Edit（编辑）或CreateNew（创建新程序）。设置反应板设置文件名称，写注释语，设置反应体系体积、所用盖类型（未设定的、膜、平盖或凸盖）、管型（未设定的、板、8连管或单管）。反应管设置文件备注反应体积盖类型管类型下面设置反应管在96孔中的放置位置，选择本次实验使用哪些孔、样品类型（sampletype）以及要检测的荧光基团种类。如果样品类型是标准品的话，还要输入其对应的量4（拷贝数、稀释倍数、nmol、pmol、ng….）。96孔位置标准品未知品空白对照阳性对照阴性对照填充染料消除设置消除整板设置

7、设置样本编号规律（3种），重复样数，下一个编号，荧光染料，选择和添加染料，标准品浓度设置点击CreateNew：出现与Edit相同的界面，同样操作。给所设定的程序命名，点击Save&ExitPlateEditing，退出此界面。3）运行：运行窗口为绿框，显示选择的运行文件及注释，点击Run，系统切换到Run界面，在WellFactorSource中选择使用PersistentWellFactor（永久校正因子，默认状态）。5点击BeginRun弹出对话框，将本次的数据记录文件（XX.opd）命名并保存，点击OK正式开

8、始运行。PCR循环开始，系统会打开Run-TimeCentral模块对实验进行实时监控，在实验结束后，进入DateAnalysis模式。实验结束后先关闭iQ5软件，再依次关闭电脑、光学检测器及扩增系统电源。4．数据分析在实验结束后，自动进入DateAnalysis模式，或在点击Workshop窗口下的，选中之前的实验文件，双击文件弹出分析模式窗