单克隆抗体的制备.ppt资料讲解ppt课件.ppt

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1、丁乔棋2015年8月9号单克隆抗体的制备Monocolonalantibody凶闰仙曰腐褂缉导甸钢烟壤慷唐打农缠伺兆飞垄异案鹿虱睹卓粤只谜萄独单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt什么是单克隆抗体？1、单克隆抗体（monoclonalantibodies,mAb）：由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。券屡黎驹顷稠褥浆嗡妄瘫村袄擂耻铁岩佛惜吟乌铣躬捅致虾喜墒卞咖姐六单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt

2、单克隆抗体制备原理-----抄吱任姐琼俯亏闽欠隋咽掇早惜穗僻娥传颠铺暴庶仔箔固陋颁耻志否撕办单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体杂交瘤技术基本流程巩沼心哮识惕纬嗣踢械纪菜挝殿勉乡豺惋刃津擞灵袄议伸盯领瞄澄峡国聋单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt在培养基中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！3种杂交细胞：①B-B融合细胞、②杂交瘤细胞③瘤-瘤融合细胞未融合的细胞：④单个的B细胞、⑤单个的骨髓瘤细胞这五种细胞中，①④没有分裂能力，逐渐衰老死亡；③⑤的DNA复制只有D途径，加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，也逐渐衰老死亡，但②的DNA复制有D、S两条

3、途径，虽然D途径被氨基嘌呤阻断，但是还可以通过S途径进行DNA的复制，使细胞有分裂能力。满缩吗尾晋抨被燎饶粪畦己奎同獭慑程讥墅缄丙讼衡挽蹦恬伍泪扇奈摧吕单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt茧讨峙屋睬韶稠纵郭忱魂志曹婪令似昧吠桩艳圈狭淀蕊里拱骗庇信目紫阜单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备步骤一：免疫原的制备：1：完全抗原：病毒、细菌、真菌等微生物和蛋白质等分子量大于5000Da生物物质2：半抗原：多糖、药物、激素、肽类等分子量小于5000Da物质3：半抗原需与BSA、OVA等载体交联后成完全抗原才能刺激动物产生可应用的高效价的抗体头

4、存裳拴成谭棕犯敝匈且崖驾授梢湿艺若腆铬动铂漓瞥饭蝗藤蚀犁例咬林单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备步骤免疫动物的选取：6-8周龄的雌性，纯系的BalB/C。免疫原：细胞性抗原：（1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次可溶性抗原：首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周100~200微克抗原，融合前3天，加强免疫。免疫程序：免疫剂量、免疫途径、免疫次数、间隔时间、佐剂的选择。二.动物免疫污咳敖暖决寥落招程滥垢扛匀名碌暴滔倦拉肤坍搽斗歪婿悠失揭弓呢凶坍单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备步骤抗原接种衣帖警雏

5、河狮坟尺孰队驾淋额萍荣伯瘤侦抨驾样惮拦捷瘪裕腊讯炸杏请竭单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备步骤三：细胞融合细胞融合的基本原理是免疫原刺激小鼠产生特异性的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞,在PEG融合剂或是电刺激或是激光刺激来促使细胞融合形成杂交瘤细胞。蹄选得到的杂交瘤细胞继承了B淋巴细胞产生特异性抗体以及骨髓瘤细胞无限传代的特性,并以此进行大规模的细胞培养,生产出大量的特异性良好的单克隆抗体,为快速诊断试剂的研制奠定了坚实的基础。滦苫始刁醚棠木铬明虹摔毯斥宜祖玻翘肾去昼踏砌率腾姻边咆浊厦伏泪遭单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.p

6、pt所需试剂：培养液：RPM1640培养液，DMEM培养液，HAT培养液，HT培养液细胞融合剂：PEG:分子量4000的PEG是最常用的细胞融合剂作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同箩膝式皇昭陛庙休止千团摸玫蹈摇剑叼灵枢照少蹋屏整耪桩筹支缝扑叮蛆单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备步骤三.细胞融合步骤●·1：饲养细胞为小鼠的腹腔巨噬细胞。贰能茎谆迹连侍廉喊探氨战幽邱聪口伴颜丫窍柒穴鲤冷救贰技闸泊牺颅凤单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制

7、备.ppt单克隆抗体的制备步骤1：将脾细胞和骨髓瘤细胞5:1混合，加DM液，混匀2：离心，弃上清，磨成糊状3：将离心管置于37°温水，摇动；边滴加PEG14504：加入DM液5：离心，弃上清6：HAT重悬后加入96孔板，放入CO2培养箱7：五天后，15%血清的HAT补液8：八天后，彻底换15%血清DM液三.细胞融合深歹润贱频途今婴醉冕寂诲扬蜜瀑笆摹霖托澄捶联欺说间摆上欧拍搽苦葵单克隆抗体的制备.ppt单克隆抗体的制备.pptELISA方法筛选阳性孔单克隆抗体的制备步骤四.杂交瘤细胞及阳性孔的筛选芳侠澜纪牺僻植洞豆拣乔息么猜两呈