肿瘤细胞培养课件.ppt

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1、肿瘤细胞的培养安徽医科大学微生物学教研室1内容纲要肿瘤细胞体外培养的重要性和应用体外培养肿瘤细胞的特征肿瘤细胞系的建立癌细胞系的建立转化细胞系的建立癌细胞系和转化细胞系的鉴定2一、肿瘤细胞体外培养的重要性和应用肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤细胞和癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。31、肿瘤病因和发病机制的研究体外试验证明了物理因素（如射线）、化学因素（化学致癌剂）及生物因素（致癌病毒、EB病毒、SV40和多发瘤病毒等），均能使正常细胞发生转化，致使正常细

2、胞永生化或恶性化，为癌的诱发因素和环境提供了实验依据。环境因素或药物的致畸、致突变研究也可为该环境条件或药物的致癌性提供实验依据，因此细胞培养是癌的发生和发展研究的理想实验研究手段。42、抗癌药物筛选方面的研究不同的癌细胞对不同的化疗药物具有不同的敏感性。采用癌细胞体外培养方法，既可研究某种药物对不同癌细胞的敏感性，为药物抗癌敏感谱提供依据；同时又可采用某种癌细胞开展对不同药物，不同剂量的敏感性研究，以筛选出对该肿瘤最敏感的化疗药物和使用剂量，供人体治疗时参考。53、癌基因和抑癌基因方面的研究实验证明癌的发生和发展与癌基因（原癌基因）和抑癌基因两种基因的表达调控密切相关。体外细胞培

3、养既利于测定癌基因及癌基因表达产物，又可以测定抑癌基因的表达水平。癌细胞的体外培养是定量研究癌基因和抑癌基因表达调控的理想工具。64、癌细胞的诱导分化和逆转方面的研究血癌往往是由低分化的幼稚细胞的单克隆恶性增生所引起，若将血癌的体细胞通过体外诱导分化，促使向终未细胞分化成为功能性血液细胞，这就可使血癌患者获得完全缓解或达到治愈的目的。这些试验只有采用细胞培养法才能在短期内观察到细胞的变化，动物试验很难判定药物的直接作用，因此细胞培养及癌的细胞诱导分化的细胞工程是进行抗癌研究、癌细胞的恶性逆转研究理想的实验诱导模型。75、癌细胞的杀伤效应研究抗癌的间接效应，往往是药物作用于机体免疫系

4、统促使免疫细胞发生对肿瘤细胞的特异性和非特异性的免疫应答，如释放免疫调节因子（如IFN、IL-2等）或细胞毒因子（LT、TNFα/β），以及激活杀伤肿瘤的淋巴细胞发挥杀肿瘤效应。这种效应均可通过体外杀肿瘤细胞试验来证实，取同体淋巴细胞经体外培养后，并加入IL-2/IFN-γ等，能明显增强NK、TCL、LAK和TIL杀肿瘤活性。经扩增达一定数量后再回输给病人，其疗效明显。8二、体外培养肿瘤细胞的特征肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增殖、遗传性状等方面都有显著的不同。9培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核

5、浆比例大。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝走行不如正常细胞规则。1、形态102、生长增殖（不受控增殖性）失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间发展，形成堆积物。失去锚着依赖性，可在琼脂、甲基纤维素等支撑物上生长。低血清要求，不依赖生长因子，因其可自分泌产生促增殖因子。癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养时，形成集落（克隆）的能力比正常细胞强。113、永生性永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡。体外培养中的肿瘤细胞系（株）都表现有这种性状。永生性和恶性（包括浸润性）是两种性状，受不同基因调控。从一些具有永生性而无恶性的细胞系，如NIH3T3、Rat

6、-1、10T1/2等细胞可以证明。124、致瘤性细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反映细胞恶性程度的指标。具体做法是：1）收集培养的肿瘤细胞，用无血清培养液洗一遍；2）计数后将0.2ml含2×106～2×107个细胞的细胞悬液注射到动物皮下。约一个月左右（最短在3天后），可见注射局部有肿瘤出现，甚至有转移瘤形成。经病理组织学检查可以确定肿瘤是否由接种的细胞产生。也可接种到腹腔或通过鼠尾静脉注射。135、浸润性浸润性是肿瘤细胞的扩张性增殖行为，培养癌细胞仍持有这种性状。在与正常组织混合培养时，能浸润入其它组织细胞中，并有穿透人工隔膜生长的能力。146、异质性通过肿瘤细胞培养及克隆

7、分析发现，同一肿瘤是由具有不同生物学特征的细胞亚群构成的。这些细胞亚群的浸润性、生长率、转移能力、核型、对激素的反应、对抗癌药物的敏感性均不同，这种特性被称为肿瘤细胞的异质性（heterogeneity）。15同一肿瘤内细胞的活力有差别，有的细胞衰老退化，有的处于周期阻滞状态，那些呈活跃增殖状态的细胞称肿瘤干细胞。只有肿瘤干细胞才是支持肿瘤生长的成分。167、细胞遗传大多数肿瘤细胞有遗传学改变，如失去二倍体核型、呈异倍体或多倍体等。17体外培养肿瘤细胞的三个显著基本特