掌握人体外周血离体培养制备染色体标本的方法

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1、掌握人体外周血离体培养制备染色体标本的方法。【实验原理】　　人外周血中的小淋巴细胞几乎都在G1期或G0期，一般情况下是不分裂的。当在离体培养条件下加入植物凝血素（PHA），小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。【实验材料和用品】　　1、材料：人外周血淋巴细胞　　2、用具：注射器、离心管、吸管、试管架、量筒、培养瓶、酒精灯、烧杯、载波片、切片合、天平离心机、恒温培养箱、显微镜。?使用的玻璃器皿在洗液中浸泡过夜，再用流水冲洗过夜，捞起沥干，过三次蒸馏水后凉干，干热间歇消毒或高压消毒。直接与培养细

2、胞接触的器皿，最后一过宜用双蒸水。橡胶制品不能用洗液浸泡，应用1%钠溶液煮沸半小时以上，流水冲洗后，高压消毒。　　3、试剂药品　　①RPMI1640培养基，含有20种氨基酸，维生素，生物素，碳水化合物，无机　　②凝血素（PHA）激活细胞分裂　　③青霉素、链霉素为广谱抗生素　　④小牛血清，促进细胞繁殖和维持PH值　　⑤肝素，主要起抗凝血作用　　⑥秋水仙索，使细胞分裂停止在分裂中期　　⑦固定液，使血清蛋白、核蛋白凝固　　⑧姬姆萨染液，使染色体染色。【实验步骤】　　1、培养基的配制　　2、采血培养　　3、秋水仙素处理　　4、收采淋巴细胞及制片　　【制片步骤】　　吹打成悬浮转入离心

3、管加少量生理盐水洗瓶顷入离心管→离心1000转/分8min→去上清液，加入温育蒸馏水6ml吹打成悬液，置37℃中低渗25min→加入固定液1ml→离心，1000转/分8min→去上清液，加固定液6ml,吹打，静置15min→离心，1000转/分8min→去上清夜，加固定液6ml吹打,静置15min→离心，1000转/分8min→去上清夜，加固定液0.5ml吹打至细胞成悬液→高空滴入冰玻片上,边滴边吹→用酒精灯烤干，贴标签，放于玻片盒里凉干待用　　用3瓶的一管做G带滴8片，2瓶的一管做SCE滴5片.标签分别为：G姓名：S姓名：【相关图片】