人类染色体标本制备

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1、人类染色体标本制备经验手册3.0版本广州市达晖生物技术有限公司印制GUANGZHOUDAHUIBIOTECHCO.,LTD达晖生物服务科研www.dahuibio.com目录第一部分人类染色体研究的实验室建设………………1页第二部分各类器械清洗与常用试剂配置………………4页第三部分人类染色体标本制备方法……………………11页第四部分探讨染色体标本制备技术中的若干问题……22页第五部分附录……………………………………………25页-25-达晖生物服务科研www.dahuibio.com第一部分人类染色体研究的实验室建设一、实验室要求1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装

2、消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。2、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。3、分析室（约15平方米）：为观察分析核型、整理资料场所。配备高清晰度带照相装置的显微镜，电脑、打印机、办公桌等。二、设备仪器（一）仪器1、超净工作台一台2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统）倒置显微镜与带照相装置的正立显

3、微镜各一台。倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体分析软件、电脑、打印机等。3、隔水式恒温培养箱一台开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。4、电热干燥箱一台5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台6、酸度计一台（可略）7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略）8、高压灭菌锅一台（可略）-25-达晖生物服务科研www.dahuibio.com9、电热磁力搅拌器一台（可略）10、真空泵（无油）一台（可略）11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台）12、水平式离心机二台转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。大容量的供制片用，

4、小容量的放置无菌室供细胞培养用。13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干支14、超声波清洗器一台（可略）15、水浴箱（0-100℃可调）（二）玻璃器皿与耗材1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。2、刻度离心管（10毫升）50支3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。4、不锈钢滤器（各种规格各一个）及滤膜（孔径中0.25微米）一盒5、注射器（1-20毫升）若干6、盐水瓶（100-500毫升）若干7、试剂瓶（磨口）10个8、蒸馏水瓶（3万或5万毫升）2个9、染色缸1个10、研钵1个11、酒精灯2盏12、滴管（带吸头）50支13、载玻片若干14

5、、试管架和离心管架各2个15、各种镊子与剪刀若干16、铝饭盒（供盛培养瓶滴管等器械消毒时使用）17、烧杯（容量50-2000毫升）各一个18、抽滤瓶（1000-2000毫升）一个19、各种规格的可调移液器吸头若干20、载波片盒（50-100片）若干-25-达晖生物服务科研www.dahuibio.com*玻璃器材的材质应采用中性硬质玻璃或硼硅玻璃三、常用药品及试剂1、培养基（RPMI1640、HamF10）2、植物凝集素（phytohemagglutinin简称PHA）3、肝素钠（抗凝剂，医用级）4、血清（小牛血清、胎牛血清）5、抗菌素（青霉素、链霉素）医用级6、秋水仙素（秋水仙碱）7、

6、氧化钾（分析纯）8、碳酸氢钠（分析纯）9、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠（分析纯）10、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，分析纯）11、三羧甲基氨基甲烷（Tris，分析纯）12、胰蛋白酶13、酚红14、姬姆沙染料（Giemsa）15、甲醇（分析纯）16、冰醋酸（冰乙酸）（分析纯）17、重酪酸钾（化学纯）18、浓硫酸（工业级）19、香柏油20、甘油（分析纯）21、乙醇（无水和纯度95%，化学纯）22、乙醚（无水，化学纯）23、生长因子（碱性成纤维细胞因子bFGF、表皮细胞生长因子EGF）24、氢氧化钠（分析纯）25、柠檬酸钠（分析纯）（注：达晖生物全套提供上述仪器和试剂产品，并提供完善的技术支持和服务）

7、-25-达晖生物服务科研www.dahuibio.com第二部分各类器械清洗与常用试剂配置一、各类器械清洗处理1、清洗液配置清洗液配方配方试剂12345重鉻酸钾（克）606080100200工业硫酸（毫升）90460100800500水（毫升）7503001000200500方法：先将重酪酸钾溶于水中，再慢慢加入工业浓硫酸。注意：配制时会产生高热，应采用耐高温材料配制。配制人员要做好防护措施（如配带保护眼镜、耐酸手套等）贮存清洗液的