张-植物组织培养——设计性实验报告.doc

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1、设计性实验报告姓名＿＿张繄一＿学号专业＿生物科学＿班级＿师范一班＿实验课程名称＿植物组织培养＿＿指导教师＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿开课学期＿＿＿2012-2013(1)＿＿＿＿＿小组合作：是○否○√小组成员：组长一．实验目的与意义：1.了解和掌握植物组织培养的方法及其要点。2.将石斛培养成为完整小植株。石斛内含有10余种生物碱，其中所含水溶性多糖，具有显著增强免疫力之功效,我国的《本草纲目》云“石斛治虚热自汗”。清热养阴，生津止渴之功效。同时对眼科疾病有明显疗效。石斛花色艳丽，花俱香味，花期长，可盆栽

2、也可悬挂，别具一格，是观赏的好品种。现代社会，人们对兰科植物的喜爱也日益增加，包括石斛在内的兰科植物、花卉越来越受到市场的青睐。二．实验方案设计（对象、方法、周期）：实验对象：石斛无菌幼苗方法与周期：培养基配制：9月27日灭毒：9月28日初代培养：9月29日-10月25日培养基配置：10月25日继代培养：11月22日-12月17日驯化：12月17日移栽：12月20日三、实验设备及材料：仪器、用具：分析天平、超净工作台、高压灭菌锅、培养箱或培养室、剪刀、镊子、手术刀、电炉、烧杯、试剂瓶、培养瓶、酒精灯

3、、精密pH试纸材料：石斛试剂：配制培养基的各种化学试剂药品（见表8-1），6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、2,4-D、NAA、1MNaOH、1MHCl、0.1%升汞、酒精、蔗糖、琼脂四．实验方法与步骤(准备阶段、实施阶段、总结阶段)及注意事项：1．母液的配制在配制培养基时，为了使用方便，避免每次配制称量的麻烦，通常将各种成分配比培养基需要量大10～100×的母液，配制母液时必须要注意，各种化学物质必须一一充分溶解后才能混合，以避免药物间出现化学反应产生沉淀。某些生长素，如2,4-D、IAA、NAA等，

4、应先用少量95%乙醇溶解，最后才加水定溶。Kt、6-BA、2ip、ZT等细胞分裂素，应先用少量1MHCl或NaOH溶解，最后才加水定容。配好的母液要标记好配制日期以及药物的浓度。2．培养基的配制　　把母液按编号顺序排列好，取大烧杯一个，先加入约300ml蒸馏水，按设计好的培养基分别吸取母液，最后定溶到所需的量。调pH至5.8，每升培养基加入6.5g琼脂粉和30g蔗糖煮溶。分装到培养瓶中，封好瓶口。3．灭菌把分装好的培养基及接种用具放入高压消毒锅进行灭菌消毒。当压力升到0.5kg/cm2时，打开放气阀

5、，放气5min后，再把放气阀关上，当压力升到1.1kg/cm2或0.11MPa时，开始计时，维持0.11MPa压力灭菌15～20min。灭菌后应把培养基放在干净处冷却待用。4．将石斛在超净工作台中转入培养基。5．一段时间后更换培养基，进行继代培养。6.驯化：将封口敞开7.移栽：将驯化后的植株移栽至土壤中五．实验结果与分析：在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，无菌石斛幼苗长成完整植株。植物组织培养是无菌地培养植物的技术，培养基的配置至关重要。实验操作过程中只要注意无菌操作就没有问题六、讨论与结论：

6、培养石斛的无菌幼苗用最基本的培养基就可以，但是配制母液时必须要注意，各种化学物质必须一一充分溶解后才能混合，以避免药物间出现化学反应产生沉淀。某些生长素，如2,4-D、IAA、NAA等，应先用少量95%乙醇溶解，最后才加水定溶。Kt、6-BA、2ip、ZT等细胞分裂素，应先用少量1MHCl或NaOH溶解，最后才加水定容。配好的母液要标记好配制日期以及药物的浓度。无菌幼苗的培养重点在无菌操作，接种用的工具、器皿、培养基必须要经过高压灭菌，接种前要用紫外线消毒接种20min，接种者要用肥皂洗干净双手，然

7、后用沾以70%酒精棉球把手和指尖消毒，严格按照无菌操作的要求进行操作，尽量减少污染。七、参考文献：《植物组织培养》《石斛属植物组织培养研究进展》指导教师评分及评语签字日期