植物组织培养实验报告

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1、植物组织培养实验报告摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第3组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.材料与方法1.1实验材料：大豆子叶1.2实验试剂与仪器（1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、

2、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液（2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。1.3实验方法1.3.1培养基的配制与灭菌1.3.1.1配制培养基的准备阶段（1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g琼脂4份，7.5g蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185gMS干粉4份（烧杯不要

3、清洗）；（3）剪小圆纸片40张，均分在两个小培养皿中大小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10张，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。（4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。1.3.1.2配制培养基（1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BANAAKT2,4-D1MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)0.50.252MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)1.00.53MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.

4、0mg/L)0.250.54MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.0（2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml；（3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。（5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。1

5、.3.1.3高压湿热灭菌（1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌锅中用二次排气法在121℃灭菌20min。（2）高压灭菌锅操作先关闭高压灭菌锅放气阀,待锅内压强升到0.05MPa时,打开放气阀排出空气,当压力表指针为0MPa时关闭放气阀。继续加热,当压力表再次升到0.05MPa时,再一次排除灭菌锅内的空气,使压力表指针再次降为0MPa，关闭放气阀。继续加热,让锅内的压力上升到一个大气压（0.103MPa），此时锅内温度为121.6℃时，控制热源，维持压力。20min后，灭菌结束，待高压锅内压力表指针恢复到零后，开启压力锅。

6、1.3.2接种1.3.2.1实验前准备工作（1）取50粒左右大豆子叶，分成单瓣，在洗衣粉水中仔细清洗，再用流水冲洗，备用；（2）接种前，用甲醛+高锰酸钾熏蒸接种室和培养室（或用臭氧发生器处理），将培养基及接种工具放入超净工作台台面，打开鼓风机，打开紫外灯；（3）洗净双手，用75%酒精擦拭双手，并用75%的酒精擦拭超净工作台台面和有关工具，同时喷洒接种室。1.3.2.2外植体的灭菌在超净工作台上进行后续工作。将洗好的大豆子叶在75%的酒精中浸泡8s，把酒精倒出，迅速加入无菌水漂洗两次，再放入升汞中浸泡2min，并用镊子不断搅拌，倒掉氯化汞，用无菌水漂洗7

7、次，漂洗时，后几次无菌水要在大豆子叶中稍许停留。最后转移到大培养皿中备用。大培养皿放入少许无菌水，浸湿大豆子叶。1.3.2.3外植体的切割（1）在火焰旁打开包接种工具的报纸，将接种工具在95%酒精中浸泡，然后用酒精灯灼烧，手不能接触接种器械的前半部分，用火灼烧镊子或手术刀要冷却后方可用于外植体的接种，防止烫伤材料，两把镊子可轮换使用；（2）待接种工具冷却后，用手术刀对大豆子叶进行切割，切割时，一次取4粒大豆子叶放入小培养皿中，同方向切割完毕后选装方向，将四个方向都切下后，再在中间补一刀，不要切穿。1.3.2.4外植体的接种在火焰旁打开试管封口膜，使试管

8、口在火焰上过一下，然后把切好的子叶放入培养基上，操作管呈倾斜状态，防止菌从口掉入，将管口再次在