植物组织培养综合性实验报告

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1、YUNNANNORMALUNIVERSITY本科学生综合性实验报告学号：104120281姓名:李胜美学院：科学学院专业、班级：10应甩生狍教育B班实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验教师：杨世忠开课学期：2012至2013学年第二学期填报时间：2012年6月20日云南师范大学教务处编印实验序号综合实验一实验名称胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验实验时间2012年3月-6月实验室组培实验室实验内容(一)实验目的1.熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的

2、化学试剂，巩固相关理论基础知识。2.熟悉配制培养基的流程及操作中应注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养基配方。3.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织继代增殖培养基配方。4.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导细胞悬浮培养基配方。5.学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导体细胞胚胎发生培养基配方。6.能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术。7.掌握愈伤组织状态的调控手段，熟练掌握愈伤组织继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养的基本操作技术。(二)实验原理、实验流程或装置示意图1、实验原理(1)培

3、养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。配制培养基时将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。(1)愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。

4、它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木与接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木和接穗沟通；在扦插中，从伤口愈伤组织可分化出不定根或不定芽，迸而形成完整植株。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。其发生过程是：外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁组织而形成愈伤组织。愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要。诱导愈伤组织常用的生

5、长素是2,4-D,J八八和NAA，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。愈伤组织形成的过程分为3个时期：诱导期、分裂期、分化期(形成期)。。(2)植物组织培养。广义的植物组织培养(planttissueculture)技术是指在无菌和人工预知的控制条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞或原生质体进行离体培养，使其再生细胞或生长、分化成完整植株的技术；狭义的植物组织培养仅指对植物的组织(如分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生的愈伤组织(callus)进行离体培养的技术。(3)植物细胞全能性是指一个生活的植物细胞，只要

6、有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当的条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株(4)悬浮培养(suspensionculture)是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度，悬浮在液体培养基中进行培养的方法。植物细胞的悬浮培养是从愈伤组织的液体培养的基础上发展起来的。(5)由单细胞或一群细胞被诱导不断再生非合子胚，并萌发形成完整植株的发育过程称为体细胞胚胎发生。由此，在胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养中将胡萝卜的贮藏根(根的变态)表面消毒后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化就产

7、生产生愈伤组织。将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的増殖。细胞悬浮培养可获得单个细胞。愈伤组织器官分化培养可获得完整植株。2.实验流程(总)MS培养基母液的配制与保存I胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养基的配制4胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养）I胡萝卜愈伤组织培养I胡萝卜愈伤组织继代增值培养胡萝卜愈伤组织细胞悬浮培养胡萝卜愈伤组织器官分化培养结果观察分析（三）实验设备及材料1、实验材料新鲜的质量良好胡萝卜肉质根。2、实验设备（1）仪器设备：冰

8、箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、电磁炉，三角瓶、果酱瓶、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、封口膜、橡皮筋、棉线、电炉、高压蒸汽灭