食品安全的生物技术检测

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1、食品安全的生物技术检测生吉萍资料整理:KLC净化设备/KLC空气过滤器http://www.klcfilter.com一、转基因生物的特性1、由启动子、结构基因和终止子组成的基因盒（genecassette）。2、抗性筛选标记基因和报告基因重组质粒基因包括：标记片段启动子目的基因终止子载体基因片段3、检测目标在检测转基因食品时，主要针对外源启动子、终止子、筛选标记基因、报告基因和结构基因的DNA序列和产物进行检测。4、检测的方式基于核酸的PCR检测技术基于蛋白质的酶学和免疫学检测技术向自动化技术发展的生物传感器生物芯片技术。二、PCR检测技术1、策略：针

2、对外源的序列进行检测，如：CaMV35S启动子，和NOS终止子，抗性筛选标记基因和报告基因。2、优点可以从加工过的食品中检测出外源基因，并且具有操作相对简单的特点，因此成为目前应用最为广泛的检测方法。表PCR检测植物源转基因食品目的DNA所用引物靶基因引物序列产物长度（bp）NPTⅡTGCGGCCGCTTGGGTGGAGAG470CTGGCGCGAGCCCCTGATGCTCATTCTTGCCCGCCTGATGAATGCTC471GCCCCGCCCTGCCACTCHPTAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAA509ATCGCCTCGCTCCAGTCA

3、ATGGUSCTGCGACGCTCACACCGATACC441TCACCGAAGTTCATGCCAGTCCAGNOS终止子AGAAGGAGTGCGTCGAAGCA178AATCATAAAAACCCATCTCAOCS终止子ATCAAATCTTCCAGCTTTAA185CAATCAGTAAATTGAACGGACaMV终止子CGCAAATCACCAGTCTCTCT201ACTGGATTTTGGTTTTAGGABARGCCGACATCCGCCGTGCCAC479GTCCAGCTGCCAGAAACCCABARNASECTGGGTGGCATCAAAAGGGAACC1

4、60TCCGGTCTGAATTTCTGAAGCCTGBARSTARTCAGAAGTATCAGCGACCTCCACC235AAGTATGATGGTGATGTCGCAGCCCamv35SGCTCCTACAAATGCCATCA195启动子GATAGTTGGGATTGTGCGTCA3、PCR技术普通PCR技术巢式PCR技术多重PCR技术PCR-ELISA技术定量PCR技术real-time实时定量PCR技术等。1）普通PCR反应*是目前应用最为广泛的技术，是其他PCR技术的基础。**通过对要扩增的目标DNA序列设计特异引物（或简并引物），优化反应条件，达到对目标

5、序列扩增的目的。***普通PCR广泛应用于分子生物学研究的各个领域。如病原菌的检测、转基因生物的检测、疾病的检测、基因的克隆、基因工程载体的构建等。2）巢式、半巢式PCR技术是消除假阴性、假阳性提高灵敏度的方法。巢式PCR技术设计两对引物，其中一对引物结合的位点在另一对引物扩增的产物之中。具体过程：首先运行扩增大片段的引物，然后以第一次扩增的产物作为模板，进行第二次扩增，这样通过产物的琼脂糖凝胶电泳比较就可以知道检测结果。如果第一次扩增是非特异的，而且扩增的片断大小与设计的相似，在电泳中无法区别，这时通过第二次扩增，由于第二对引物与扩增产物中没有配对的序

6、列，因此不能扩增出产物。这样就消除了假阳性的干扰。同时，由于第一次扩增起到模板数量放大的作用，使检测的灵敏度增加了3-6个数量级，使检测的低限达到pg乃至fg级。3）多重PCR技术即设计一组引物，在一个PCR反应过程中，对多个目的片断进行扩增。特性：包括内部对照、指示模板数量和质量、消耗的时间和试剂少，使得多重PCR技术已发展成为一种通用的技术。应用在病原体检测、性别筛选、连锁分析、法医研究、模板定量和遗传疾病诊断等。在对细菌的PCR分析中，应用多重PCR技术非常有优越性，可以区分同一属中的种和株，这样我们就检测出在同一属病原菌中，是否有对人体有害的病原

7、菌或产毒菌。目前，已有利用多重PCR技术检测Salmonella、Escherichiacoli、Listeria等食品有害菌。4）PCR-ELISA技术指用ELISA技术检测PCR的产物。在PCR反应体系中加入生物素标记的dUTP和其他3种dNTP，这样在扩增反应中生物素标记的核苷酸就会掺入到新合成的DNA链中去，经过电泳或过柱除去游离的dNTP、引物和引物二聚体后，用3`端经DIG标记的特异探针与之结合，然后加到包被有抗生素抗体的酶标板上，此后，用ELISA法进行定性或定量分析。4、酶学检测技术目前在基因工程中应用的报告基因和抗性筛选标记基因都是编码

8、某一种酶。主要有：卡那霉素抗性标记基因（NptⅡ）、β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS