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《脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第2期V01.26。No.22010年3月Mar.2010脱氧雪腐镰刀茵烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备PreparationofartificialantigenandpolyclonalantibodiesagainstdeOxyniValenOl张燕马冬月段素欣姜小梅王硕ZHANGYanMADong—yueDUANSu—xinJIANGXiao—meiWANGShuo(食品营养与安全教育部重点实验室,天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457)(KeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety,Mini
2、stryofEducation,FacultyofFoodEngineeringandBiotechnolgy,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin300457,China)摘要:对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的两种半抗原合成方法sariumculmorum)和燕麦镰刀菌(fusariumavenaceum)产进行对比研究,合成半抗原,并采用活化酯法将半抗原与牛生,该类真菌毒素是污染粮食的主要毒素,一般大麦、小血清白蛋白偶联制备得到免疫原,通过特定程序免疫日本大麦、玉米、燕麦中均含有较高浓度的
3、呕吐毒素,它具有急性毒耳白兔获得了多克隆抗体。抗血清效价为1:32000,protei性、免疫毒性和胚胎毒性,是赤霉病麦引起人、畜中毒的主nA—sepharose4B亲和层析纯化的D0N抗体与DON、3一AC—要毒素。其结构式见图1。D()N(3一乙酰氧基脱氧雪腐镰刀茵烯醇)、15AC—DON(15一乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、T一2毒素、0TA(赭曲霉A)、oHZEN(玉米赤霉烯酮)的交叉反应率分别为:100、500、2.5O、0.10、0.01、0.01,表明了所制备DON抗体的高特异性。0关键词:脱氧雪腐镰刀茵烯醇;人工抗原;多克隆抗体;效价
4、;特异性Abstract:DeoxnivalenolhaptenwassynthesizedsuccessfullyfollowedOHbystudyingofthetwokindsofhaptensynthesismethod.Theim—呕吐毒素的化学结构munogenwaspreparedfollowingaschemethatemploysactiveesterChemicalStructureofDONmethodfortheconjugationofthehaptenstoBSA(bovineserumal—bumin),withwhic
5、hpolyclonalantibodiesagainstde。xyniva1en。1目前检测呕吐毒素的方法主要有:薄层层析法wereraisedinrabbitsafterimmunization.Theantiserumtiterw3s1(TLC)[、高效液相色谱(HPIC)[、气相色谱(GC)[和免:32000,andtheantiserumwaspurifiedbyproteinA—sepharose4Bimmunityaffinitychromatography.Theantibodyspecificitywas疫法l6],免疫法中最常用的是
6、酶联免疫吸附试验checkedonthebasisofthe50inhibitionlevels,relativecrossreac—(ELISA)[8-]。其中,传统的薄层层析方法操作复杂,仪器tivitieswithDON,3AC-DON,l5一ACD0N,T2,0TAandZEN检测结果准确可靠,但是样品前处理过程复杂,并且仪器设Werefoundtobe100,500%,2.50,0.10,0.01%,0.O1.备比较昂贵;酶联免疫吸附试验操作简便,样品前处理简单,Keywords:deoxynivalen01;artificialantig
7、en;polyclonalantibodies;titer;specificity不需要净化,适用于大量样品的快速筛选,具有很好的应用前景。脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxyniva1enol,DON),又名呕吐本研究主要对两种半抗原合成方法进行了比较,得出一毒素(vomitoxin),是B型单端孢霉烯族化合物中的一种,主种有效的方法,制备出了高灵敏度的多克隆抗体,为建立呕要由禾谷镰刀菌(fusariumgraminearum)、黄色镰刀菌(fu一吐毒素的ElISA检测方法提供依据。l材料与方法基金项目:国家科技支撑计划课题(项目编号:2009BADB9
8、B03)1.1试剂与仪器作者简介:张燕(1970~),女,天津科技大学食品工程与生物技术学1.1.1材料呕吐
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