谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法

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1、谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法　　中华人民共和国国家标准　　GB/T　　　　Methodfordeterminationofdeoxynivalenolincerealandcerealproducts　　1　主题内容与适用范围　　本标准规定了谷物及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层色谱测定法及免疫测定法(ELISA)的基本要求。　　本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。　　第一法的最低检出浓度为/kg。　　第二法的最

2、低检出浓度为/kg。　　　第-篇　薄层色谱测定法　　2　原理　　谷物及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后，加热薄层板。由于在制备薄层板时加入了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光，与标准比较。　　3　试剂　　以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。　　　三氯甲烷。　　　无水乙醇。　　　甲醇。　　石油醚(60～90℃或30～60℃)。　　　乙酸乙酯。　　　乙腈。　　　丙酮。　　　异丙醇。　　　乙醚。　　无水乙醚。　　氯化铝(AlCl3·6H2O):化学纯。　　中性氧化铝:层析用，经300℃活化4h，置干燥器中备用。

3、　　　活性炭:20g活性炭，用3mol/L盐酸溶液浸泡过夜、抽滤后，用热蒸馏水洗至无氯离子，在120℃烘干备用。　　硅胶G:薄层层析用。　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇(以下简称DON)标准溶液，精密称取DON，加乙酸乙酯-甲醇(19:1)溶解。转入10mL容量瓶中，用乙酸乙酯-甲醇(19:1)稀释至刻度，此标准溶液含/mL。吸取此标准溶液，用乙酸乙酯-甲醇(19:1)稀释至10mL，此溶液每毫升含DON25μg。　　4　仪器　　　小型粉碎机。　　　电动振荡器。　　75mL玻璃蒸发皿。　　　层析柱:内径2cm，长10cm，不具活塞。　　10mL具塞浓缩瓶：底部具刻度尾管。　　　玻璃板:5×20cm。

4、　　　薄层涂布器:。　　　展开槽：内长25cm，宽6cm，高4cm。　　　紫外光灯：365nm。　　微量注射器:10μL、50μL。　　50mL平底管。　　双波长薄层扫描仪:带数据处理机。　　5　分析步骤　　　提取　　称取20g粉碎样品置于200mL具塞锥瓶中，加8mL水和100mL三氯甲烷-无水乙醇(8:2),密塞。在瓶塞上涂层水，盖严防漏，振荡1h，通过折叠快速定性滤纸过滤，取25mL滤液于75mL玻璃蒸发皿中,置90℃水浴上通风挥干。　　　净化　　　液-液分配　　　谷物:用50mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入100mL分液漏斗中，再用20mL(玉米样品用30mL)甲醇-水(4:

5、1)分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。　　　谷物制品(蛋糕、饼干、面包等):用100mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入250mL分液漏斗中，再用30mL甲醇-水(4:1)分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。　　振摇分液漏斗,静置约15min,使分层后,将下层甲醇-水提取液过柱净化，不要将两相交界处的白色絮状物放入柱内。　　　柱净化　　　小麦及其制品:在层析柱下端与小管连结处塞约脱脂棉，尽量塞紧，先装入中性氧化铝，敲平表面。再加入活性炭，敲紧。将层析柱下端小管插入一橡皮塞，塞在抽滤瓶上，抽滤瓶中放一平底管接受过柱液，将抽滤瓶接上水泵或真空泵，稍稍开启泵，使活性炭压紧，将分液漏斗中的甲醇

6、水提取液小心地沿管壁加入柱内，控制流速为每15s18～20滴(3mL/min)，甲醇-水提取液过柱快完毕时,加入10mL甲醇-水(4:1)淋洗柱，抽滤，直至柱内不再有液体流出。过柱速度控制在2～3mL/min，速度太快净化效果不好，太慢耗时太长。　　　玉米:同，只是将活性炭的用量改为。　　　制备薄层层析用样液　　将过柱后的洗脱液倒入75mL，玻璃蒸发皿中,用少量甲醇-水(4:1)洗涤平底管。将蒸发皿置沸水浴上浓缩至干。　　　小麦:趁热加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，使充分沸腾将残渣中的DON溶出，并将乙酸乙酯挥发至干，再加入3mL乙酸乙酯同处理一次，将溶剂

7、挥干，最后加3mL乙酸乙酯，加热至沸，放冷至室温后转入浓缩瓶中,再用三份乙酸乙酯洗涤蒸发皿，并入浓缩瓶中。　　　小麦制品、玉米:趁热加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，使充分沸腾，将残渣中DON溶出,放冷至室温后转入浓缩瓶中,加约甲醇-丙酮(1:2)于蒸发皿中，用玻棒搅动溶解残渣，将蒸发皿置水浴锅上挥干溶剂后,加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，转动蒸发皿，使充分沸腾，放冷至室温后转入同一浓缩瓶中