液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

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1、粮食加工2010年第35卷第6期液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇刘旭，李尧，龚珊，任正东，赵鹏，陈晓峰(陕西省粮油产品质量监督检验所，西安710016)摘要：建立检测谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的液相色谱方法，通过不同提取方法的比对来确定最佳的DON提取方案，并最终确定使用乙腈一水(体积比V／V，84／l6)提取，经过DON专用净化柱的净化处理后。采用紫外检测器(入=220nm)及Cl8亲水分离柱测定。结果表明，用高速均质机均质4min提取，可大幅度提高方法回收率，回收率达到9O．7％～98．9％．方法最低检出限为50

2、Ixg／kg。关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)；液相色谱法；谷物中图分类号：TS210．7文献标志码：A文章编号：1007—6395(201O)06—0092—03脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)又乙腈(Merck，色谱纯)，甲醇(Merck，色谱纯)，呕名呕吐毒素，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由禾谷吐毒素标准品(FERMENTEKLTD)。镰刀菌和粉红镰刀菌产生。DON污染粮谷的情况非1．3操作步骤常普遍，世界各地均有报道．特别在中国、日本、美(1)提取称取粉碎过筛样品25．0g于均质杯国、阿根廷和

3、南非。在我国胃癌、食管癌等恶性肿瘤中，加入100mLV(乙腈)：(水)=84：16提取液，于高发区，DON是居民饮食中主要的污染霉菌毒素之高速均质机上均质4min，静置。一。DON主要在田间侵染小麦、玉米等谷类作物，当(2)净化浓缩取2mL样品提取液上清液到人摄人了被DON污染的食物后，会导致厌食、呕吐、净化小柱顶端，向下推活塞，使溶液全部过柱，收集腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严净化后溶液放人100mL标准磨口蒸发瓶中，取出重时损害造血系统造成死亡。注射器，加入8mLV(乙腈)：(水)=84：16提取液到DON化

4、学名称为3，7，l5一三羟基一12，l3一环氧柱顶端，将溶液彻底过柱，合并净化液，于60℃减压单端孢霉一9一烯一8一酮．为无色针状晶体，熔点为蒸干，用2mL流动相定容。151～153oC。其化学性能非常稳定，具有较强的热抵1．4测定抗力和耐酸性，在pH值10．0条件下．100℃加热60色谱条件：C18亲水性分离柱(250×4．6mm．5min部分被破坏，120oC加热30min和170加热m)，柱温箱40℃，紫外检测器波长220nm，流动15min完全被破坏Ill。目前。测定粮谷作物中的脱氧相：(水)：(甲醇)：(乙腈)=92：4

5、：4，流速1．5mL／雪腐镰刀菌烯醇的方法很多。如薄层色谱法(TLC)、rain，进样量2OL。气相色谱法(GC)、酶联免疫法(ELISA)等。本文采用标准曲线的绘制：使DON质量浓度分别为了液相色谱法，使用Agilentl100液相色谱仪配紫0．10、0．25、0．50、1．O0、2．00、5．00、10．00p．g／mL，将该外检测器和C18亲水性分离柱。不仅获得了准确的标准系列分别进样2OL，以DON的质量浓度为横测定结果．而且极大地提高了T作效率。坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。1．5验证1材料与方法(1)空白样品制备取

6、空白样品。依据样品的处1．1仪器理方法进行处理。Agilent1100液相色谱仪(配备紫外检测器)，(2)回收率及精密度试验取空白样品，加入不TRILOGY呕吐毒素专用净化柱TC—T200．C18亲水同体积DON标准储备液，使其最终进样液理论质量性分离柱，旋转蒸发仪，高速均质机，真空泵，小型粉比分别为100、300、1000g／kg。每个质量比取5个碎机。平行样，根据样品的处理方法进行处理。1．2试剂2结果收稿El期：2010—07—13作者简介：刘旭(1980-)，男，助理工程师，从事粮油卫生检验。2．1定性分析2010年第35

7、卷第6期粮食加工45DON标准样品定性分析色谱图见图1。4o335二)圣昌莲：趔磐2叵oI)ON质量浓度／(LLg。mI)时间／rain图2DoN标准曲线图1DON标准样品色谮图从图3可见，在DON的出峰时间14．095min由图1可以看出DON保留时间为14．095min。左右没有杂质干扰峰，表明本方法专属性很好。2．2定量计算样品中DON含量为、，Cx2x50xl000盘————一一’式中：x——样品中DON的含量，~g／kg；C——由标售准曲线查得进样液质量浓度，mL；m——样品质量，g。2-3标准曲线图3样品色谱图由图2可

8、见线性关系为Y=20．78521X(R=0．99987)，根据信噪比3倍峰面积，计算出本方法的2．4．2回收率及精密度实验最低检出限为50~g／kg。取两组不同含量的样品各6个．分别确定方法2．4方法验证的精密度，结果见表1。2．4．1专属性表1精