脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的筛选与鉴定

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1、粮油食品科技第21卷2013年第5期生物工程脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的筛选与鉴定1，2222程亮，伍松陵，沈晗，孙长坡(1．河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;2．国家粮食局科学研究院，北京100037)摘要:以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为唯一碳源，通过平板分离纯化，经高效液相色谱(HPLC)检测，对降解效果较高的菌株进行分子鉴定。最终筛选得到的菌株对DON的降解率达56．61%，通过16SrDNA序列分析，鉴定为假单胞杆菌，为更进一步的研究提供了菌株材料。关键词:脱氧雪腐镰刀菌烯醇;筛选;鉴定;降解中图分类号:Q93

2、－331文献标识码:A文章编号:1007－7561(2013)05－0095－03Screenandidentificationofdeoxynivalenoldegradationstrains1，2222CHENGLiang，WUSong－ling，SHENHan，SUNChang－po(1．CollegeofBioengineering，HenanUniversityofTechnology，ZhengzhouHenan450001;2．AcademyofStateAdministrationofGrain，Beijing10

3、0037)Abstract:Takingdeoxynivalenol(DON)asthesolecarbonsource，thestrainswithhighdegradationeffectweremolecularidentified，afterseparationandpurificationbyplateanddetectionbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)．ThedegradationrateoftheselectedstrainstoDONachieved56．61

4、%．ThosestrainswereidentifiedasPseudomonasvia16SrDNAsequencing，whichprovidedhelpforthefurtherresearch．Keywords:deoxynivalenol;screening;identification;degradation脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，又目前国内外较为普遍的去除真菌毒素的方法主［11］名为呕吐毒素(vomitoxin)，其化学名称为3，7，15－要有物理吸附、化学处理和生物转化等。物理吸三

5、羟基－12，13－环氧单端孢霉－9－烯－8－酮，为附主要是吸附一些有极性的真菌毒素，并不是真正雪腐镰刀菌烯醇的脱氧衍生物，是单端孢霉烯族毒去除。化学方法可以破坏大多数真菌毒素，但破坏素中的一种，主要是某些镰刀菌产生的次级代谢产了营养成分并影响适口性。生物转化将真菌毒素转物，广泛存在于污染的小麦、大麦、燕麦、玉米等谷物化或代谢为无害的产物，而且不会导致营养成分丢［1－3］和饲料中。失，不改变适口性，因而被认为是去除饲料中真菌毒［12］畜禽DON中毒症状主要表现为拒食、呕吐、免素的最佳方法。本实验室从土壤中分离到一株疫力下降、母畜不孕或

6、流产以及死亡等;慢性蓄积会能以脱氧雪腐镰刀菌烯醇为唯一碳源生长并转化导致畜禽食欲减退、日增重下降、营养不良、神经内DON的细菌，以用于DON的生物转化和霉变粮食［4］分泌改变、免疫抑制等。DON具有很强的细胞毒的脱毒。性，它对于原核细胞、真核细胞、植物细胞、肿瘤细胞1材料与方法等均具有明显的毒性作用。DON对红细胞具有溶1．1材料［5］血作用，还可作用于骨髓造血细胞产生细胞毒1．1．1样品和试剂［6］性，也作用于T细胞、B细胞、IgA+细胞产生免疫筛选样品采自全国各地受DON污染的土壤和［7］毒性作用，抑制或增加细胞程序死亡。多数研

7、究粮食样品。都表明DON具有胚胎毒性和致畸作用。动物试验生物降解实验中使用的DON为经本实验室固态表明，长期小剂量饲喂含DON或其它毒素的饲料，发酵提纯获得;DON标准品购自美国Sigma公司。［8－10］可以诱发不同器官的肿瘤。PCR、克隆pMD19－T载体、连接所用试剂均购收稿日期:2013－01－08自TaKaRa公司;PCR产物胶回收试剂购自Axygen基金项目:国家重点基础研究发展计划(2013CB127805);国家科技支撑计划(2011BAD03302－2)公司;其它所用试剂为常用生化试剂。作者简介:程亮，1987年出

8、生，男，硕士．通讯作者:孙长坡，1975年出生，男，博士，研究员．95生物工程粮油食品科技第21卷2013年第5期1．1．2培养基TAACAAGGTAACCGTAGGGGA－3')。提取细菌基［15］基础富集培养基:蛋白胨10g，Na