酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验.pdf

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1、澎江学业种学第56~2015年第6期圜文献著录格式：罗俊霞，李德瑜，袁小伟，等．酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验[J]．浙江农业科学，2015，56(6)：883—887．DOI：10．16178／j．issn．0528-9017．20150649酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验罗俊霞，李德瑜，袁小伟，赵建波(1．郑州市农产品质量检测流通中心，河南郑州450006；2．郑州市园艺工作站，河南郑州450006)摘要：采用酶抑制法测定5O种有机磷和l0种氨基甲酸酯类农药的检出限，并进行酶活性减退试验。结

2、果表明，有机磷中敌敌畏和对氧磷的检出限较低，速灭磷、二溴磷、喹硫磷、敌百虫、辛硫磷、除线磷、甲胺磷和甲基毒死蜱的检出限相对较高，其他4O种有机磷农药的检出限更高；氨基甲酸酯中，涕灭威亚砜的检出限较低，速灭威、灭多威、异丙威、涕灭威、甲萘威、涕灭威砜、仲丁威的检出限相对较高，克百威和3一羟基克百威的检出限更高；配制好的酶在9℃的冰箱中保存，其活性并不随着时间的推移而降低，但每天测试的酶活性都有一定差别；用酶抑制法测定农药残留重现性不佳；与酶、显色剂和底物反应的提取液的浓度也影响酶抑制法测定农残的结果。关键词：酶抑制法；有机磷；氨基甲酸酯

3、；检出限；酶活性；重现性中图分类号：s481文献标志码：B文章编号：0528—9017(2015)06-0883—05农药残留是农药使用后残存于农产品、生物体性出现。本试验旨在探讨酶抑制法速测结果的及环境中的农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质准确度。的总称⋯。自20世纪80年代以来，有机磷和氨基1材料与方法甲酸酯类的农药因见效快、效果好且使用方便而逐步成为世界上使用最多的农药。但这些农药的滥1．1仪器与试剂用，导致农产品尤其是水果蔬菜中存在的农药残留CL-BIII型16通道的农残速测仪(上海博纳新超标，并通过食物链的富集作用，将其毒害

4、性在人技术研究所、上海复博农业科技有限公司)；SHA．体中放大，对人的健康及生命安全造成严重威c型双重恒温水浴振荡器(杰瑞尔电器有限公胁。有机磷和氨基甲酸酯类农药中的部分品种司)；HH．W21．Cr420型电热恒温水浴锅(北京三具有高毒性，大量使用会造成环境污染、作物药害二八科学仪器有限公司)；WH一861型漩涡混合器；及人畜中毒。据世界卫生组织统计，全世界每年农Rongtai5mL和Thermo200L的移液枪；农药残药中毒者约300万人，其中有机磷中毒占70％E53。留检测试剂盒(深圳市安鑫宝科技发展有限因此，快速对蔬菜、水果中的

5、农药进行测定成为亟公司)。待解决的问题。近年来，因简便、灵敏、经济等特由农业部环境保护科研监测所生产的浓度为点，酶抑制法快速检测技术已成为国内外快速检测1000mg·L的氨基甲酸酯类农药标准品10种和农药残留的主流技术，在我国得到较快推广应有机磷标准品50种，使用时按照需要稀释成用，美国、加拿大、日本、巴西、印度等10多个80／xg·mL的备用液。国家也将酶抑制法试剂盒或试纸条作为普查农药残1．2试剂配制留和田间实地检测的基本手段。尽管如此，此种方安鑫宝科技发展有限公司生产的农药残留检测法也存在较大局限性，如检测时常有假阳性和假阴试剂

6、盒里有缓冲试剂、酶试剂、显色剂和底物，在收稿日期：2015-01-04基金项目：河南省现代农业产业技术体系专项($2010-O3)作者简介：罗俊霞(1972一)，女，高级农艺师，本科，主要从事农产品安全品质检测工作。E．mail：71819@163．com。通信作者：赵建波。E-mail：71819@163．com。囝澎江雇J-：千学第56卷2015年第6期每次使用前，缓冲试剂用500mL的蒸馏水溶解，1．5．2有机磷农药残留检测限的隔日重现性测定酶试剂(为乙酰胆碱酯酶)和显色剂(为二硫代酶抑制法测定。9月l9和22Et，分别采用硝基

7、苯甲酸)分别用3．1和1O．5mL的缓冲溶液进1．3．1节的方法，用对氧磷、皮蝇磷、灭菌磷和百行溶解，底物用3．1mL的蒸馏水进行溶解。其中治磷等4种有机磷，测定添加后浓度分别为0．05，酶试剂来源于昆虫。0．5，1，2和3mg·kg～，每浓度分别做3次平1．3样品处理行，记录其抑制率。1．3．1试剂盒方法1．5．3酶活性测定参照深圳市安鑫宝科技发展有限公司试剂盒提取2瓶酶分别配制好后混匀，取一瓶显色剂配供的方法。将样品剪成1CI'II见方的碎片，称取2g置好之后一起保存至9℃冰箱中，每日用1．4．1和于50mL烧杯中，加入10mL缓

8、冲液，用双重恒温1．4．2节的方法测定其3min内吸光度的变化并记水浴振荡器振荡提取10min后，移取提取液3mL录，2种方法每日各测3次平行值。于10mL试管中，依次往提取液中加入0．1mL的1．6判定方法酶液和0．1