黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体制备及其ELISA检测方法的建立.pdf

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1、2011年21(2)生物技术57黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体制备及其ELISA检测方法的建立孙艳秋，赵奎华“，刘长远，曹远银(1．沈阳农业大学植物保护学院，辽宁沈阳l10866；2．辽宁省农业科学院植物保护研究所，辽宁沈阳110161)摘要：目的：制备黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体，建立其酶联免疫吸附分析(ELISA)的检测方法。方法：分别以黄瓜细菌性白枯病菌胞内蛋白和菌体为免疫原，制备两种抗体，优化间接ELISA检测条件。结果：间接ELISA法测定两种纯化的菌体抗体(J4)和胞内蛋白抗体(P2)效价分别为1：32000和1：4000，二抗的最佳稀释度为l：3000，方阵试验表明J

2、4的工作浓度为1：16000，抗原的最佳包被浓度为10cfu／ml，P2的工作浓度为1：2000，抗原的最佳包被浓度为10cfu／ml，两种抗体的灵敏度均为10cfu／ml，与黄瓜细菌性角斑病菌等26个菌株无交叉反应，特异性强。结论：成功制备了黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体，建立了ELISA检测方法。关键词：黄瓜细菌性白枯病菌；抗体制备；效价；酶联免疫吸附分析；检测中图分类号：$432．42文献标识码：Adoi：10．3969／j．issn．1004—311X．2011．02．049PreparationofSpecificAntibodiesandDevelopmentofInd

3、irectELISAfortheDetecti0n0fPseudomonasviridOTavaonCucumberSUNYan—qiui1，ZHA0Kui—hua’．LIUChang—yuan。CA0Yuan—yin(1．CollegeofPlantProtection，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenymag110866，China；2．InstituteofPlantProtection，LiaoningAcademyofAgriculturalSciences，Shenyangl10161，China)Abstract：Objecti

4、ve：ThespecificpolyclonalantibodiesofPseudomonasvindiflavaoncucumberwereprepared，andELISAmethodwases-tablished．Method：TwoantibodieswerepreparedbyimmunizingthehealthymalerabbitswiththeintracellularproteinandstrainofPvindiflava，andthedetectionconditionofindirectELISAwereoptimized．Result：Thetiter

5、swererespectively1：32000and1：4000ofthetwopurifiedantibodiesfromstrain(J4)andtheintracellularprotein(P2)．Theoptimumdilutionofthesecondaryantibodywasl：3000．ItwasshowedthatworkingconcentrationofJ4anditsantigenoptimumcoatingconcentrationwere1：16000and10。cfu／ml，andthatofP2werel：2000and10cfu／mlbyth

6、echecker—boardtests．Thetwoantibodiessensitivitywereboth10cfu／mL．whichhadhighspecificandnocrossreactionwithPseudomonassyringaepv．1aehrymansandtwenty—sixstrainssoon．Conclusion：ThespecificantibodiesofP．viriaiflavawereobtainedsuccessfullyinthisexperimentandaindirectELISAmethodforspecificdetection

7、ofP．viridiflavftwasestab-lished．Keywords：Pseudomonasviridiflava；antibodypreparation；titer；ELISA；detection黄瓜细菌性白枯病是由绿黄假单胞菌[Pseudomonasvirid-1．1．1．1菌种伽口(Burkholder1930)Dowson1939]引起的，是近年来辽宁黄瓜细菌性白枯病菌(Pseudomonasviridiflava)，由作者实省黄瓜生产上发现的一种新的细菌病害