复氧后人心内膜微血管内皮细胞的增殖作用.pdf

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1、陕西中医2015年第36卷第5期621扶芳藤益心方对缺氧／复氧后人心内膜微血管内皮细胞的增殖作用李成林江会镇△陈博灵▲卢健琪▲潘朝锌▲王庆高▲湖北中医药大学(武汉430000)摘要目的：研究扶芳藤益心方对缺氧／复氧后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)增殖的影响。方法：取体外培养的第4代HUMCE分为造模组：扶芳藤益心方组(FY)、益心方组(Y)、卡托普利高、中、低浓度组(10～~mol／L、10mol／L、10mol／L)对照组(H／R)和非造模组(N)。造模组行缺氧／复氧(H／R)处理，非造模组不做缺氧／复氧处理，两组均添加相应的含药血清干预培养24h后，通过MTT法测定

2、各组OD值，流式细胞仪检测细胞Caspase一3阳性细胞数，酶联免疫法(ELISA)检测各组血管内皮生长因子受体一2(VEGFR一2)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果：与造模组比较，非造模组OD值大(P<0．05)，VEGFR一2、VEGF含量与Caspase一3阳性细胞数均高于造模组(P<0．05)。与对照组比较，扶芳藤益心方组OD值高(P<0．05)；Caspase一3阳性细胞数升高9．87(P<0．05)；VEGFR一2、VEGF浓度升高(P<0．05)。与扶芳藤益心方组比较，益心方组、卡托普利中、低剂量组oD值低，卡托普利高剂量组OD值高(P％0．05)；卡

3、托普利低剂量组VEGFR-2、VEGF浓度低(P<0．05)，卡托普利高、中剂量组均高于扶芳藤益心方组(P<0．05)；益心方组、卡托普利中、低剂量组Caspase一3阳性细胞数分别较扶芳藤益心方组降低6．77％、2．49％、5．7，卡托普利高剂量组升高4．39(P<0．05)。结论：扶芳藤益心方可以提高内皮细胞在缺氧／复氧后的增殖活性，降低内皮细胞的凋亡率，优于益心方组、卡托普利低、中剂量组，且提高缺氧／复氧损伤后内皮细胞VEGFR一2、VEGF浓度，优于卡托普利低浓度组和益心方组，改善内皮功能。主题词微血管内皮细胞动物实验大鼠@扶芳藤益心方【中图分类号1R29【文章标识码

4、】Adoi：10．3969／j．issn．1000—7369．2015．05．047血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfac—地人三部之气不能同步运行、气血瘀滞而发病。治疗当以补torVEGF)是目前已知的作用最强的促血管生成因子。生理情虚、通龙路、祛瘀为大法。根据壮医组方理论，针对补虚、通路、况下，VEGF及其受体的表达水平均很低，只有在内皮细胞受祛瘀治法，需投以公药进行组方。笔者自拟以扶芳藤为君、人损时才会有增殖效应。缺血缺氧是VEGF最强有力的调控因参和三七为臣、石菖蒲为佐使的扶芳藤益心方及去扶芳藤的益素。VEGFR主要分布于血管内

5、皮细胞。缺氧对受体表达也起心方(以下简称益心方)，观察试验中对缺氧／复氧后人心内膜重要调节作用。Waltenberger发现，缺氧时人脐静脉内皮细胞微血管内皮细胞的影响，现将研究结果报道如下。中VEGFR一2水平上升，而VEGFR一2mRNA仍保持稳定甚至1材料和方法1．1试剂MTT试剂盒(Sigma公有所下降。研究发现，无论在生理还是在病理情况下，均能促司)，卡托普利纯粉(上海远慕生物科技有限公司提供，批号：进新生血管的形成，调节血管生成的大多数环节，包括内皮细K0164)，VEGFR、VEGF试剂盒<武汉华美，批号：Y19012415，胞外基质溶解、内皮细胞迁移、增生和管

6、腔形成、增加细胞间黏Y05012414)，一抗：RabbitAnti—active—Caspase一3antibody附和血管细胞黏附分子水平及诱导内皮细胞上相应的配体和(ab4051)同型对照：兔IgG(碧云天A7016)，二抗：FITC标记受体的表达等。血管内皮细胞的损伤是心血管性疾病的关键的山羊抗兔二抗(ab6717)。环节，心脏缺血再灌注过程中最先波及的基本部位也是最关1．2主要仪器与动物酶标仪(BioTek公司)，Millpore键的部位是心内膜微血管内皮细胞_2]，它是诸多毒素、病毒、炎Guava6HT流式细胞仪，Eppendorf冷冻离心机，紫外分光光症因子等的

7、重要靶位，该部位的变化对各组织、器官的损伤和度计CK津，型号：UV一1800)，SD大鼠，SPF级，180～220g，雌雄功能的恢复影响巨大0]。壮医认为，心内膜微血管内皮细胞各半(广西医科大学动物实验中心)，原代人心内膜微血管内皮损害可归属于壮医“龙路病”范畴，人体气血虚弱的基础上，邪细胞、原代内皮细胞特制培养体系(武汉原生原代生物医药科毒滞留龙路，使局部的“龙路”网络瘀阻不畅，终致道路不通、天技有限公司，HUM—CELOO17，)，扶芳藤益心方醇提膏、益心方醇提膏(广西中医药大学制药厂提取，药材红参