多柔比星白蛋白纳米粒的制备及其对肝癌细胞Bel-7404的杀伤作用-论文.pdf

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1、药物生物技术422PharmaceuticalBiotechnology2013，20(5)：422～426多柔比星白蛋白纳米粒的制备及其对肝癌细胞Bel一7404的杀伤作用缪凤琴，安艳丽，杨蕊，唐秋莎，张建琼(东南大学医学院，江苏南京210009)摘要制备多柔比星白蛋白纳米粒(DOX／BSANP)，观察其药物缓释规律，探讨其对肝癌细胞的杀伤作用。去溶剂-化学交联法制备DOX／BSANP载药纳米粒；透射电镜观察其形态及粒径；分光光度法测定包封率及载药率；体外药物释放实验考察缓释特性；MTr法及FCM观察其对肝癌细胞的体外杀伤作用，动物实验观察其体内抑瘤效应。透射电镜下DOX／BSANP

2、呈圆球形，分布均匀，直径约为120nm，动态光衍射测定其水合粒径约为170D．m，包封率为82％，载药量为5％，体外药物释放实验显示，载药纳米粒中约50％的药物持续缓慢释放，可持续长达7d；MTI"实验显示DOX／BSANP能显著抑制细胞的增殖，FCM检测显示其能诱导肿瘤细胞凋亡；体内抑瘤实验显示，载药纳米粒的疗效优于DOX原药的疗效。成功制备多柔比星白蛋白纳米粒。体内外实验证明DOX／BSANP纳米粒可有效抑制肝癌细胞Bel-7404的生长。关键词多柔比星；白蛋白纳米粒；去溶剂一化学交联法；肝癌中图分类号B．965文献标志码A文章编号1005-8915(2013)05．0422—05

3、原发性肝癌是常见的恶性肿瘤，我国肝癌的发病率占抑制作用，以期为肝癌的治疗提供科学依据。全球的55％，死亡率占全球45％⋯。目前肝癌首选的治疗1材料和方法方案仍是手术切除，然而，仅10％～15％的患者在确诊时尚有手术机会，且手术切除率低，术后复发率高；化疗常常是1．1材料与仪器可供选择的主要治疗方法和手段，然而，化疗药物大多为细牛血清白蛋白(Sigma公司)；注射用盐酸阿柔比星(深胞毒性药物，对肿瘤组织和正常组织缺乏靶向性，具有较大圳万乐药业有限公司生产)；肝癌细胞株Bel-7404(中国科的毒副作用；因此，寻求一种有效、安全、靶向性高、毒副作学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研

4、究所细用小的治疗手段迫在眉睫J。胞库)；AnnexinV—FITC细胞凋亡检测试剂盒和碘化丙啶阿柔比星为蒽环类化合物，是肿瘤化疗方面最重要的(碧云天生物技术研究所)；RPMI1640培养基(美国Gibco治疗药物之一，其抗肿瘤谱广，活性强，对白血病及多种实公司)；25％戊二醛购(中国医药集团上海试剂公司)；其余体瘤如乳腺癌、胃癌有较好疗效，对肝癌的有效性十分引入试剂均为分析纯。注目。但其静脉用药后，毒副作用大，特别是骨髓抑制和心透射电子显微镜(Transmissionelectronmicroscope，脏毒性，剂量大时，可能产生不可逆性心力衰竭，使其在肿TEM)(日本电子株式会社产品

5、)；紫外分光光度计Spec一瘤治疗中的应用受到限制。~oumlab52(上海棱光精密仪器厂)；UV-3150双光束分光白蛋白具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物光度计(日本岛津公司)。相容性好等优点，因而作为药物载体得到广泛的研究。1．2方法白蛋白分子中的氨基酸以肽键相连接，且扭曲成团状，具网1．2．1多柔比星白蛋白纳米粒的制备精密称取适量牛状空隙，为镶嵌携带药物创造了有利条件。当与药物结合血清白蛋白，滴加少许溶解的注射用盐酸阿柔比星于上述后，可延缓药物在注射部位的释放，并能提高药物疗效和降混合液，加3蒸水充分搅拌混匀，调节pH值为9．0，室温下低毒副作用。与脂质体和乳剂相比，白

6、蛋白纳米粒的体内缓慢加入100mL无水乙醇，搅拌1～2h，溶液出现浑浊，缓和贮存稳定性较好。慢加入适量2．5％戊二醛，继续搅拌固化12h，将反应液倒入本文以牛血清白蛋白作为载体，采用去溶剂．化学交联离心管内超高速离心，反复用3蒸水洗涤后，4oC度保存法制备阿柔比星白蛋白纳米粒并观察其对肝癌细胞的增殖备用。收稿日期：2013-04-02修回日期：2013．05-23基金项目：国家自然科学基金项目资助(No．81071881，No．81271635)。作者简介：缪凤琴(1970-)，女，讲师，硕士，研究方向：纳米药物载体，E．mail：101006402@SeL1．edu．cn。通讯作者：

7、张建琼，女，教授，博士，研究方向：免疫生物学，Email：zhjq@seu．edu．cn。缪凤琴，等：多柔比星白蛋白纳米粒的制备及其对肝癌细胞Bel-7404的杀伤作用425Control(BSANPalone)0．834±0．0310DOX／BSANP(theeffectivedoseofDOXis10ms／kg)0．2874-0．15265．59DOXunenveloped(theeffectivedoseofDOXis10ms／kg)0．