血管紧张素转化酶性质及胶原蛋白对其活性抑制效果的研究.pdf

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1、第35卷第7期家畜生态学报Vo1．35NO．72014年7月ActaEcologiaeAnimalisDomasticiJu1．2014血管紧张素转化酶性质及胶原蛋白对其活性抑制效果的研究李枭辰，刘爽，邓小霞。，王子华。，孙晓悦，姜宏德，吴德峰，庞海。*(1．福建农林大学动物科学学院，福建福州350002；2．吉林省金梓源生物科技有限公司，吉林双辽136400；3．清华大学医学院，北京100084[摘要]血管紧张素转化酶(AngiotensinConvertingEnzyme，ACE)与人和动物血压调节密

2、切相关，为高血压疾病的药物靶标，筛选ACE抑制剂可为研制新型高血压疾病预防药物提供可靠的先导化合物。试验从猪肺中提取ACE，首先对其酶学性质进行了试验分析，继而考察了三个不同商品化的胶原蛋白肽对ACE抑制活性的影响。采用分光光度法，以马尿酰一组氨酸一亮氨酸(Hip—His-Leu，HHL)为底物测定血管紧张素转化酶的活力。结果表明：血管紧张素转化酶的最适pH为8．0；最适温度为4OC；350mmol／L氯离子存在的情况下，能够明显提高ACE的活性；金属离子对酶活的影响表现出促进或抑制的作用。通过比较，在低

3、温条件下提取的自制胶原蛋白肽的ACE抑制活性要高于另外两种商品化胶原蛋白肽产品。[关键词]血管紧张素转化酶；酶学性质；胶原蛋白；抑制活性[中图分类号]$811．6[文献标识码]A[文章编号]1005—5228(2014)07—0049—05高血压作为一种慢性疾病，在我国乃至全球都的酶学性质，不仅对高血压的防治具有积极作用，并威胁着人类的健康，并且每年其发病率都呈上升趋且对新型ACE抑制剂的研究和开发大有帮助。势[1]。据统计，在2012年我国高血压患病率约为由于化学合成的ACE抑制药具有引发咳嗽]、242

4、]。作为经常性伴有危险因素的疾病，高血压肾功能障碍等不良反应。因此，安全且副作用低也会导致身体出现各种相关疾病，并且它是导致心的天然ACE抑制剂日益受到人们的关注。时下热血管疾病的主要诱因之一，其危害性可见一斑l_3]。门的胶原蛋白，广泛地存在于动物的结缔组织中，是与此同时，高血压对动物健康也存在着很大隐患，尤一种细胞外基质蛋白，对机体和脏器起着支持、保护其是现代猫犬等宠物对人们的生活越来越重要，长等作用，也是修复各种损伤组织的重要物质]。作期的养尊处优并且缺少运动，使得他们患有高血压为天然保健品的胶原蛋

5、白，经过研究证明具有抑制等“富贵病”的几率大大上升。ACE活性作用_8]。因此，本试验选取三种不同产血管紧张素转化酶(AngiotensinConverting地的胶原蛋白，对其ACE抑制活性进行评价和比Enzyme，ACE)是一种哺乳动物组织中普遍存在较，以期为发掘具有ACE抑制活性以及为治疗人的，含锌离子的膜结合外肽酶，催化血管紧张素I和动物的高血压的胶原蛋白提供基本依据。(AngitensinI，AI)形成具有强烈收缩血管功能的1材料与方法血管紧张素II(AngitensinII，AII)，引起血压

6、升高[4]。因而，ACE在血压的调节中发挥重要作用，1．1试验材料与试剂与高血压的形成密切相关。因此，通过研究ACE新鲜猪肺由市场购得。HHL和马尿酸标准品[收稿日期]2014-03—26，修回日期：2014—04—18[作者简介]李枭辰(1988一)，男，福建南平人，硕士研究生，主要从事中西兽药药理学及新制剂研究。E—mail：742936379@qq．COrn*[通讯作者]吴德峰(1951-)，男。浙江金华人，教授，博士生导师。主要从事中兽医学、药理学及生态学等领域研究。E-mail：zj99289@

7、yeah．net庞海(1961一)，男，吉林通化人，副教授，博士生导师，主要从事蛋白质结构生物学研究。E—mail：panghai@mail．tsinghua．edu．cn50家畜生态学报第35卷(Hippuricacid，HA)均购自Sigma公司，硫酸铵、1．2．4．3氯离子对酶活的影响在反应体系中加盐酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙酸乙酯等试剂均入不同浓度的氯离子，按标准方法测定酶活。以不为国产分析纯。自制胶原蛋白由吉林省金梓源生物加任何物质时的酶活为100。计算在不同浓度氯技术有限公司生产，德国产胶

8、原蛋白(AYMIN)和离子存在情况下的相对酶活。法国产胶原蛋白(FRANSAU)均购自市场。1．2．4．4金属离子对酶活的影响在反应体系中1．2试验方法加入不同浓度的二价金属离子。二价金属离子包1．2．1ACE的提取根据参考文献_1u的做法：括：Mg抖、Fe抖、Co、Zn抖。以不加任何物质时的取200g新鲜猪肺，用预冷的0．9的生理盐水清酶活为100。计算在不同浓度金属离子存在情况洗，剪成小块，除去脂肪和大血管，加入600mL