菜豆晕疫病检测技术研究进展-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2013，41(10)：4365，4367责任编辑乔利利责任校对李岩菜豆晕疫病检测技术研究进展陈曦，张明哲，林晓佳，夏拯，陈吴健，吴志毅(浙江省检验检疫科学技术研究院，浙江杭州310016)摘要介绍了生理生化检测技术、经典血清学检测技术、现代分子检测技术3种常用的菜豆晕疫病传统检验技术，并讨论了免疫磁性一实时荧光PCR技术、环介导等温扩增技术和红外光谱检测技术3种植物病原细菌最新检测技术应用于菜豆晕疫病的可能性。关键词菜豆晕疫病；检测技术；研究进展中图分类号$435．

2、29文献标识码A文章编号0517—661l(2013)10—04365—01目前我国外来生物入侵情况十分严重，一些危险性外来前针对菜豆晕疫病菌已有较多该方法检测试剂盒。该方法有害生物相继传人，新的疫情不断突发，据中国农业科学院效果较好，检测过程易操作。但是该方法检测目标单一，不万方浩研究员报道，每年各种外来有害生物对我国造成的总适用于口岸检测。经济损失估计在2000亿以上。另外，随着社会和经济的发1．3现代分子检测技术现代分子检测技术的建立使得植展，我国为了使各种蔬菜杂粮能保障供应，开通了农副产品物病原细菌检测向更快捷、稳定的

3、方向发展。20世纪后期，的绿色通道，使得以前仅在局部地区发生的疫情也逐步扩散核酸分子杂交技术在植物病原细菌检测方面广泛应用。但蔓延。是由于其耗时长、自动化程度低、检测结果稳定性差、试验条2011年浙江共进口大豆302万t，至2012年已达到331件难以掌握的特点，逐渐被PCR技术取代。PCR技术的发万t。随着大豆进口量的日益增加，其可能携带的有害生物展经历了从传统PCR技术到实时荧光PCR技术的发展，目进入我国的风险也越来越大。菜豆晕疫病菌(Pseudomonas前国内对菜豆晕疫病菌的2种PCR检测技术都已做了相关savast

4、anoipv．Phaseolicola)作为一种豆科重要病原物，可侵研究。然而，传统PCR技术易有假阳性的发生，而实时荧光染扁豆、赤豆、木豆、桑橙、多花菜豆、月豆、菜豆、碗豆、葛、野PCR技术则存在设备成本高的缺点。葛、绿豆、豇豆和大豆。尽管很多国家采取了一系列防御措2植物病原细菌检测新技术施，该病害仍以惊人的速度传播和蔓延，至今已在世界各大由于传统的检测技术在日常检测中存在各种问题与缺洲的60多个国家和地区有分布。该病菌主要传播途径是通陷，随着科学技术的发展，对植物病原细菌的检测手段也日过带毒种子传播，在种子上可潜伏存活2年

5、以上时间，一旦益繁多。下面介绍了几种植物病原细菌检测新技术，并探讨进入我国将造成巨大损失。因此，加强口岸检疫工作，从源了其在菜豆晕疫病检测中的应用。头杜绝该病菌是最佳方法。鉴于此，笔者介绍了该病目前常2．1免疫磁性一实时荧光PCR技术免疫磁性一实时荧用的检验技术，并探讨了植物病原细菌的最新检测技术应用光PCR技术将经典的血清学检测技术与现代分子检测技术于菜豆晕疫病的可能性，以期为预防菜豆晕疫病提供借鉴。相结合，其检测灵敏度达到50～100cfu／N1，将PCR检测技1菜豆晕疫病传统检测技术术灵敏度提高了100倍左右。该方法具有

6、准确、灵敏、快菜豆晕疫病作为一种豆科细菌性病害，其传统的检测技速等优点。术主要有生理生化检测技术、血清学检测技术。及现代由于血清学和荧光PCR检测技术在菜豆晕疫病菌检测分子检测技术。中已被普遍应用，所以利用免疫磁性一实时荧光PCR技术1．1生理生化检测技术以前生理生化检测技术主要依据对该菌进行检测已具备完善基础，仅需进行部分反应条件的菌落形态、培养性状、烟草过敏性反应及Koch假说测定、生探索，即可在实际检测中应用。理生化测定等方法对植物病原细菌进行检测鉴定。现今科2．2环介导等温扩增技术环介导等温扩增(Loop—media．

7、学技术迅猛发展，衍生出许多新的检测方法，如Biolog、脂肪tedisothermalamplification，LAMP)技术是近年来发展出的一酸(FAME)等。但是这些方法普遍存在检测周期长、检测过种利用4个特殊设计的引物和具有置换活性的DNA聚合程繁琐的缺点。酶，在恒温条件下特异、高效、快速的新核酸扩增技术。1．2经典血清学检测技术血清学检测技术应用于植物病LAMP技术在微生物检测领域中的应用十分成熟，已有多原细菌检测已有较长时间，目前已形成多种检测方法，如项利用LAMP技术检测细菌的国标和行标发行。ELISA、单克隆抗

8、体检测法、免疫放射性分析法、离体检测法LAMP具有特异性强、等温高效、敏感性高、操作简单等等。国内较常用的主要是EIISA中的双抗体夹心酶联法，目优点，在建立快速检测菜豆晕疫病菌方面具有广阔的应用前景。LAMP技术的关键在于能否设计专化、高效的特异性引基金项目浙江省检疫局项目