食品微生物实验.docx

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1、一、简单染色法:1、涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2整个过程中要注意无菌操作。（示范无菌操作技术）2、干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方温火烘干，切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。4、染色：将固定过的涂片加适量草酸铵结晶紫染色1-2min。5、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6、干燥：涂片放在空气中晾干或用吸水纸轻轻吸干

2、，。7、镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。8、绘图：9、实验完毕后的处理：将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。各部分还原，将电源灯亮度调至最低后关闭，将最低放大倍数的物镜转到工作位置，同时将载物台降到最低位置看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。二、革兰氏染色（X）1.制片：分别涂片、晾干和固定。2.初染：将玻片置于废液缸玻片搁架上，滴加适量（以

3、盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1～2min，水洗（倾去染色液，用水小心地冲洗）。3.媒染：滴加碘液，媒染1min，水洗。4.脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20～30s至流出液无色，立即水洗5.复染：滴加沙黄复染液,复染2～3min，水洗、晾干。6.镜检：低倍—高倍—油镜三、细菌芽孢染色法及观察1、制片：按常规方法制作涂片、干燥、固定。2、染色：①加染色液：加5%孔雀绿染色液于涂片处，然后将玻片放在玻片搁架上，再将搁架放在三角铁架上，用微火加热至染料冒蒸汽时开始计算时间，约维持5min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。②水洗：待玻片冷却后，用洗瓶中的自

4、来水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。③复染：用沙黄染色2min。④水洗：蒸馏水冲洗，吸干。3、镜检：低倍—高倍—油镜。四、酵母菌大小及数量测定(X)一）细胞大小测定1、对目镜测微尺的校正镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上（目镜测微尺已在镜筒中），在高倍镜下进行目镜测微尺校正。2、细胞大小的测量酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜载物台上。调节显微镜光圈，用目镜测微尺测量细胞直径。（二）细胞数量测定1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。2.取酵母菌稀释液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3.静止5mi

5、n后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央计数室。4.在高倍镜下计数：随机计数五个中格的菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。5.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。五、放线菌(X)1、倒平板：将培养基融化后，冷却至50°C左右，倒20mL左右于灭菌培养皿内，凝固后使用2、插片：用无菌镊子取无菌盖玻片，插在平板培养基上（40°-50°插入）3、接种与培养：用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，28°C培养7d4、观察：在载玻片中央滴一滴0.1%美兰，小

6、心用镊子将盖玻片抽出，带菌面朝下，覆盖于染色液上，浸泡2min后，用吸水纸将多余染色液吸干，镜检:低-高六、霉菌1、水浸片制法：A.先观察霉菌的菌落形态;B.于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉兰液于载片中央；C.用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置于液滴中；D.再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡2、置于低倍镜下观察，必要时换高倍镜。七、配制培养基1.固体培养基：牛肉膏3g.蛋白胨10g.NaCl5g.琼脂14g.PH值7.2~7.4.水1000ml。半固体培养基：牛肉膏3g.蛋白胨10g.NaCl5g.琼脂5g.PH值7.2~7.4.水

7、1000ml。2.灭菌生理盐水含0.85%NaCl的蒸馏水灭菌。3.高压灭菌121℃，20min（生理盐水，培养基）4.搁斜面，倒平板·称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。·溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（杯中有刻度），玻棒搅匀，加热溶解。·加琼脂粉：加热过程中要不断搅拌，完全沸腾后补水至刻度。·调pH值：用1Mol/lNaOH溶液调节到7.2~7.4用pH试纸对照。·分装：利用移液器（待液体温度稍降再倒入）分装培养基与生理盐水，用完立即清洗，注意不要污染塞子。（若移液器针头够不着就用移液管）。·进行包扎，贴