食品微生物实验.ppt

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1、食品微生物实验实验一培养基的配制、分装和灭菌目录1234实验目的实验原理实验器材实验方法657思考题注意事项实验结果实验目的了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类；掌握配制培养基的一般方法和操作步骤；懂得高压蒸汽灭菌的基本原理及使用注意事项；了解几种常用灭菌方法。实验原理培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。根据据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一

2、部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。根据用途可分为:1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求2.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。从培养基的物理状态可分为:1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固

3、剂而成的半固体状培养基。实验原理灭菌:是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。常用的灭菌法1、干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌适合于培养皿，试管，吸管等的灭菌。160-170℃，保持2h。2、湿热灭菌加压蒸汽灭菌法其步骤如下：1）灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2）接通电源，进行加热3）排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，

4、待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。4）当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5）灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮

5、时杀灭。过滤除菌法：不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。紫外线灭菌法：一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。化学药剂消毒灭菌：微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。1.药品和试剂牛肉膏、

6、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％盐酸溶液。2.器材天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。实验器材培养基的配制分离培养微生物常用器皿的准备培养基和玻璃器材的灭菌实验步骤培养基的制备过程配方及配量---称取药品----加热溶解----调节pH----过滤----分装----加棉塞----包扎----灭菌----搁斜面----贮存实验方法1.称量按照培养基配方与配量分别称取各药品。取少量的水于烧杯中，将各培养基成分（琼脂除外）逐一加入水中待溶。2.溶解在烧杯中加

7、入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。3.调节pH值用玻璃棒沾少许液体，测量pH值。用1mol/L氢氧化钠和1mol/L盐酸调节pH。4.加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。实验方法5.分装：根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。6.包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。7.灭菌：高压蒸汽灭菌，121℃，20min8.搁斜面：9.贮存:培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。实验方法实验方法注：灭菌后的培养基冷

8、却至50-60℃后搁置斜面。斜面的长度不超过试管总长的一半。实验方法实验方法1、牛肉膏蛋白胨固体培养基2、察氏培养基（培养霉菌用）3、马铃薯葡萄糖琼脂培养基4、高氏1号培养基（培养各种放线菌用）称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种