糖化血红蛋白检测原理及意义.doc

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1、糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述2007年3月19日         糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述                                             冯念伦 范卫华刘捍东                                        （山东省立医院 济南250021）糖尿病(DM),主要是2型糖尿病的发病率，目前在世界上无论发达国家还是发展中国家均明显增加，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症已

2、经成为病人至残和早亡的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有1000亿美元，糖尿病已经成为世界各国的主要保健卫生问题，对糖尿病及其并发症防治的研究是2０世纪后２０年国际卫生保健研究的重点之一。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近2-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总

3、血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c有多种方法，目前临床上比较常用的方法有两种：乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法；分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。1、 糖化血红蛋白（HbA1c）的形成及特点血液中红细胞内的血红蛋白Hb会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应,血红蛋白Hb的β链N末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的加成反应,，形成不稳定的中间产物---醛亚胺（前GHbA1c）迅速重排成不可逆的酮胺，然后缓慢重构形成HbA1c。糖化血红蛋白HbA1c的特点：1．1 糖化血红蛋白HbA1c的百

4、分比含量与即时所检测到的血糖水平无关。1．2 由于红细胞在外周血中的寿命是90－120天，所以糖化血红蛋白HbA1c百分比反映了测定前２－３个月的血糖平均水平。而GHbA1c的合成始终在进行，其糖化程度与血液中的葡萄糖浓度及持续时间呈正相关；病人用药治疗后，较血糖、尿糖含量下降晚３－４周，糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量是对糖尿病长期控制有重要意义的一项指标 。2、 测定糖化血红蛋白HbA1c的方法测定糖化血红蛋白HbA1c的方法有（1）离子交换高压液相色谱法HPLC；包括：离子交换色谱及亲和色谱；（2）微柱法；（3）免疫分析法，包括：放射免疫法、酶免疫法和乳胶免疫凝集法。（3）电泳法（4

5、）电喷离子质谱等。2.1、离子交换色谱分析法的原理：用高效微粒离子交换剂作固定相，以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相，依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离。 离子交换剂可以分成两种：阳离子交换剂和阴离子交换剂。   亲和色谱法是利用生物高分子能与相应的专一配基分子可逆结合的原理将配基通过共价键牢固地结合于固相载体上制得亲和吸附系统。带有杂质的高分子分离目的物在一定条件下，能以某种次级键与已固相化的配基结合，而杂质则不吸附，除去杂质后变换条件，又可以使待分离的高分子物质重新解离，获得纯化。化糖血红蛋白被一种牢固的但可逆的五环络合物所结合

6、，通过它们的顺-乙二醇基被硼酸固定住。首先洗脱的是非糖化血红蛋白，随后用含有山梨醇的缓冲液将糖化组分洗脱下来，此缓冲液与结合在柱上的糖化血红蛋白竞争硼酸结合位点。2.2、免疫分析法使用单克隆或多克隆抗体直接测定血红蛋白β-链上糖基化的N末端的4-8个氨基酸，因此对HbA1c上的糖基特异性好。但是许多同源的糖化血红蛋白变体也有相同的N末端结构，从而对结果造成干扰。2.3、电泳法的分析原理是：非糖化血红蛋白游离的氨基末端能与硫酸根反应，改变分子的电泳迁移率。而化糖血红蛋白不能与硫酸根反应，电泳迁移率不变。血红蛋白容易受到琼脂板介质中磺酸盐基团或以醋酸纤维膜作支持物的缓冲液中的硫酸右旋糖的硫酸盐基

7、团作用，经过电泳分离，可以将糖化血红蛋白从血红蛋白中分离出来。2.4、电喷离子质谱(electrosprayionizationmassspectrometry,ESI-MS)法 研究证明，ESI-MS法测出的是真正的HbA1c，而目前临床上使用的各种方法测出的实际上是一系列混合物，包括糖化的a链、a链和b链双糖化及b链其他部位被糖化的产物。因此，用ESI-MS法测出的数值要低于目前临床习用的各种方法。由于E