ELISA法检测乙肝五项的影响因素与临床意义.doc

《ELISA法检测乙肝五项的影响因素与临床意义.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、ELISA法检测乙肝五项的影响因素及临床应用【摘要】众所周知，乙肝的致病原是乙肝病毒，乙肝病毒在肝细胞内生存、复制后，再排岀到血液屮。所以不仅血流屮病毒高负荷，而且肝脏的大多数肝细胞都被感染。当今社会谈乙肝色变，主要有下列几个方面：长期病毒携带或患病怕传染给亲属和周边的人群，同时亦担心受到社会的歧视；治疗乙肝和务种护肝药名目繁多，且各有利弊而不知所从；长期病毒携带或久治不愈而演化成肝驶化哄至肝癌。作为检测乙肝五项的工作人员应该慎重操作,对每一个结果负责，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。【关键词】ELISA法；乙肝两对半；乙肝两对半乂称乙肝五项，为国内常用的乙

2、肝病毒(HBV)感染的检测血•清标志物。乙肝病毒免疫学标记有表血抗原(HBsAg)、表面抗体(抗・HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(抗・HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗・HBc或HBcAb)”。可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA)因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大，因此，如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测屮至关重要的问题木研究分别选择3家国产ELISA试剂盒

3、对来甘肃省武威肿瘤医院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，乙肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒，通过ELISA法检测300例健丿隶体检患者血清屮HBsAg水平，检测出的阳性标木再用免疫胶体金试纸条检测，比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性，现报道如下:1资料与方法1.1一般资料选择我院2013年7月——2013年11月健康体检患者300例，其屮，男170例，女130例；年龄20〜54岁，平均3()岁。抽取患者静脉血，分离血清，低温(2-8°C)保存待检。1.2方法1.2.1检测试剂盒分别购白上海江莱生物科技有限公司(简称江莱)

4、，北京万泰生物药业股份有限公司(简称万泰)、英科新创(厦门)科技有限公司(简称新创)。其中包括96孔(48人份)酶标板，阴性对照ImL,阳性对照1mL,酶结合物6mL,显色剂A6mL,显色剂B6mL,2()倍洗涤液40mL,终止液6mL,说明书1份，不干胶3张，自封袋1个。抗HBV金标试纸条购白新创。1.2.2检测仪器振荡器(型号ZD-8800)o购白上海精密仪器仪表有限公司，酶标仪购白郑州安图生物丁程有限公司，型号：Anthos2010o1.2.3检测方法采用ELISA法检测。严格按照试剂盒操作步骤进行，即：①使用前,充分混匀所有试剂，勿产生泡沫。②根据待测样品数量确定所需酶标板数量

5、。每次实验设空白对照孔1孑L。阴性对照、阳性对照各2孔。待检标木用稀释液1：1稀释后加入50L于酶标板反应孔内。采用棋盘法做倍比稀释.使标木浓度依次为40、20、10、5.0、2.5、1.25、IU/L。同样方法稀释阴性血清。③加人稀释好后的标准品及阴性血清50L于反应孔，待测样品50L于反应孔内，立即加入50L的生物素标记的抗体。盖上膜板.轻轻振荡混匀，37°C孵冇lh。④甩去孔内液体，毎孔加满洗涤液，振荡30S,甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作5次。⑤每孔加入80L的亲和链酶索一HRP,轻轻振荡混匀，37°C孵育30mino⑥每孔加入底物A、B备50L,轻轻振荡混匀，37°C温

6、育10mino避免光照射。⑧取出酶标板，迅速加入50L终止液，加入终止液后应立即测定结果。⑨在450nm波长处测定各孔的OD值。分别用3个不同公司的试剂盒进行初测，初测ELISA阳性标木再采用胶体金法测定1次。金标试纸条于检测线及对照线位置处各出现一条紫红色线条为阳性，只于对照线位置出现1条紫红色线条为阴性。未出现任何线条表示金标试纸条失效。1.3结果判定及观察项目测定孔OD值/阴性对照孔OD值(S/N)大于2.1判为阳性。比较3个不同公司ELISA检测灵敏度、特异性及与胶体金法检测的一致性2结果江莱、力泰、新创三家厂家生产的试剂盒检测HBsAg阳性率分别为13%(39/300)、10

7、%(30/300)、20%(60/300)。新创阳性性率最高。阳性血清经金标试纸条检测阳性结果分别为30、23、42例。新创试剂盒ELISA法检测抗原包被浓度为1.25IU/L时,仍可检出阳性标木。其他两个试剂盒最低检出浓度为2・5IU/Lo3.结论:不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合儿个试剂盒结果及其他试验进行印证。4.讨论：慢性乙型肝炎为世界性医学难题乙一，为世界范围内引起慢性肝脏疾病的主要病原Z一，起病缓慢，感染率