酶标仪检测乙肝五项的影响因素.doc

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1、酶标仪检测乙肝五项的影响因素目前，随着医学检验技术的不断发展，酶标仪各种仪器逐步进入实验室，给检验工作带来方便、快速、准确的同时，也会由于种种原因，使检测结果出现假阳性或假阴性的情况。根据长时间的观察，我们总结以下六种因素可能会影响乙肝五项的检测结果。   １　用血清和血浆测乙肝五项对结果的影响过去，我们常用血清标本测乙肝五项，但分离血清至少需要２０～３０ｍｉｎ，而采用肝素抗凝血浆可立即离心并直接上机测定。随着酶标分析仪的发展，真空抗凝管因不用分离血清可以直接上机测试，并可以快速离心，使检验更快捷、方便。为了探讨

2、肝素抗凝血浆用于检测乙肝五项的可行性，我们对肝素抗凝血浆与血清标本测定结果作了以下比较.   １．１　资料与方法   １．１．１　一般资料　  正常人３００例均为健康体检的学生。将每份血标本分作两份，１份不用抗凝剂，另一份则用抗凝剂。患者均为确诊肝病患者，如三阳或乙肝携带者或其他疾病患者。   １．１．２　试剂与仪器　试剂上海科华生物技术有限公司（９６人份），质控血清为黑龙江省临检中心提供（１．０ｎｇ／Ｌ）；酶标仪为西班牙生产。   １．１．３　方法　 ＥＬＩＳＡ法。血浆：抗凝剂；肝素钠，每１００Ｕ肝素钠溶液可与

3、２．０～３．０ｍｌ血液混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心５～１０ｍｉｎ；血清：将标本溶于，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心５～１０ｍｉｎ。结果见表１、表２。   １．２　结果　 采用血浆标本测定乙肝五项要优于血清标本（Ｐ＜０．０１），同时还具有快捷、准确之特点，值得临床推广应用。在ＥＬＩＳＡ测定过程中，用血清当离心不好时，可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针孔处于全阻塞或半阻塞状态，造成未结和标记酶洗脱不测底，导致“花板”，以致出现假阳性或假阴性。所以，经过上述试验对比乙肝五项测

4、定用血浆标本更好。   ２　试剂的影响   乙肝五项试剂生产厂家较多，不同厂家生产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差异。资料显示，不同厂家试剂的特异性和敏感性分别为８９．４％～９９．３％、７８％～８９％，存在较大差异。有的厂家酶标板孔间Ａ值差＞１５％；标记酶的活性及显色液的稳定比较差。使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此。选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。   ３　操作技术的影响   ３．１　加样吸嘴的洁净与否及吸量的准确性　 直接影响检验结果。由于吸嘴构造特殊，导致清洗困难，加大了交叉污染的机

5、会。建议使用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗，定期校准。   ３．２　温浴影响　 ９６孔酶标板结构特别，易产生边缘效应，抗原、抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均、贴密封膜，防止污物浸入。   ３．３　洗涤是ＥＬＩＳＡ操作的重要环节　 手洗条件一致性较差，对结果影响较大，半自动与全自动洗板机使用不当也会影响结果，血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针小孔呈全阻塞或半阻

6、塞状态，造成未结合标记酶洗脱不彻底，导致“花板”，造成假阳性或假阴性。所以，操作洗板机过程中，要经常观察洗板机针孔内洗液的通畅状况，及时纠正。洗板机不用时，应用去离子水清洗几遍。   ３．４　必须采用酶标仪检测　 肉眼判断结果时，显色浅不易观察，影响结果的准确性，必须使用酶标仪检测，以保结果一致性。   ４　干扰物质的影响   有人认为，大约４０％的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ｉｇ（ｓ）抗体、交叉反应

7、物质和其他物质等。如ＲＦ因子可与标记二抗的ＦＣ段法结合造成假阳性，补体从Ｃｌｑ分子结合点暴露出来，则补体Ｃｌｑ可将两者连接起来造成假阳性，采用５６℃３０ｍｉｎ灭活补体可降低假阳性率，高浓度的ＡＦＰ（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体，会导致本底过深，影响检测结果。   5 药物的影响   高效价的乙肝免疫球蛋白会与ＨｂｓＡｇ形成复合物，影响ＨｂｓＡｇ的检出。所以，一些ＨｂｓＡｇ阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，ＨｂｓＡｇ检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现。为预防乙肝，部分ＨｂｓＡｇ阴性人群在接种乙肝疫苗

8、后的１～２周内，血清中可检测出ＨｂｓＡｇ成份，形成一过性ＨｂｓＡｇ阳性，这可能是乙肝疫苗主要成份是ＨｂｓＡｇ，有方法能够把它检出，如电化学发光法建议接种乙肝疫苗后１个月内不应作ＨｂｓＡｇ检测。   ６　样本采集与处理的影响   标本严重溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内，不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本