多肽合成与修饰技术服务.doc

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1、多肽合成与修饰技术服务实验技术：多肽合成是一个固相合成顺序一般从C端（羧基端）向N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种：固相合成和液相多肽合成。[晶莱生物]实验技术原理：多肽合成仪以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序（序列，一般从C

2、端-羧基端向N端-氨基端）不断添加、反应、合成，操作最终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。实验操作流程：1、去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。 2、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。3、洗脱和脱保护：多肽从柱

3、上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA）洗脱和脱保护。多肽修饰类型：1、C端标记技术：C端酰胺化（Amidation,C-termainal）、醛基化（Aldehydes）、醇基化（Alcohols）、pNA(p-Nitroanilide)AMC、AFC、巯基乙胺化（Cysteamide）、酯基化（Ester）、N-烷基化（N-AlkylAmides）等2、N端标记技术：乙酰化Acetylated（Acetylated）、Palmytolyl、HYNIC、生物素标记（Biotinylated）、Br乙酰化（Brom

4、oacetylated）螯合反应（DOTA，DTPAconjugated）、甲醛化（Formylated）、十四烷基、十八烷基化（Myristoylated）琥珀酰化、棕榈酸化、苹果酸化、脂肪酸化等（Succinylated）3、荧光标记修饰：C端修饰:AFC,AMC,Dap(Dnp),Lys(Dye),pNA,Rh110N端修饰:Bodipy-FL,Cy3,Cy5,TexasRed,5-Tamra,5-lodoacetamidofluoresceinRhodamine110andRhodamineBLuciferin,

5、EDANSFAM,FITC,MCA,Rox,Sulforhodamine101,5-TAMRA4、环化反应：首尾成环，中间成环，特殊成环（N->CorHeadtoTail）2对二硫键，3对二硫键（Disulfide(S-Sbondformation).Trisulfideformation）天然产物活性肽成环（Cyclic-naturalpeptides）5、甲基化修饰：侧链甲基化Lys(For),Lys(Me),Lys(Me)2,Lys(Me)3,Arg(Me)2symmetrical,D-Tyr(Me),D-Tyr(

6、Et)N端甲基化（N-Me-Arg,N-Me-Asp,N-Me-Glu,N-Me-Leu,N-Me-Nle,N-Me-Nva,N-Me-Phe,N-Me-SN-Me-Ser,N-Me-Trp,N-Me-Thr,N-Me-Val）6、几种特殊修饰：各种偶联（BSA,KLHconjugatedpeptidesforantibodyproduction）、磷酸化（Phosphoserine,Phosphothreonine,Phosphotyrosine）、磺化（SulfatedTyrosineorSerine）、MAPS(M

7、ultipleAntigenicPeptide)、糖肽（Glycopeptides）、PEG修饰（PEGylation） 实验注意事项：客户提供：1、多肽序列、数量、纯度及特殊要求2、冻干多肽可在-20度保存或室温保存3、溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。4、为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。